詳細(xì)介紹
人急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞;HL-60圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞;HL-60圖片
形態(tài)特性 髓樣
生長特性 懸浮
特征特性 該細(xì)胞含有myc+致癌基因,受體表達(dá):補(bǔ)體Fc;致瘤性:陽性。
培養(yǎng)條件 IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium 20%FBS
傳代方法 每2-3天換液一次,細(xì)胞接種密度為1E+05/ml,不要超過1E+06/ml。
傳代情況 完成目錄中顯示細(xì)胞污染廢棄
凍存條件
支原體檢測
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
RNA Tris Base( 三羥甲基氨基甲烷 )100g
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)pBR322/BstN I50 次
AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶200U
微量 RNA 定量試劑盒1mL
120905-200人淋巴細(xì)胞分離液 1.077(FICOLL 配置 ) 200mL
填入法 DNA 末端標(biāo)記試劑盒 C5次
L- 苯丙氨酸10g
SDS-PAGE 分離膠配膠液500mL
3120-0.1微量 RNA 助沉劑0.1mL
130933-50FTA 血片 DNAout50 次
預(yù)混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (29:1)100g
ABTS 溶液,7mM 50mL
KM71 酵母菌種1mL
12-212DH10Bac 菌種1mL
硫酸鐵100g
dNTP 溶液,100mM 0.5mL
真菌種屬鑒定 PCR Mix 1100 次
超氧化物歧化酶,人10ku人血清白蛋白 V500mg
硝酸纖維素膜,13×20cm1張
70908-100DNA PAGE 膠回收試劑盒100 次
核糖核酸酶 HII250U
1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 盒裝已滅菌 )100 支
自誘導(dǎo)培養(yǎng)基 (lac 啟動子 )200mL
CAS9003-39-8聚乙烯吡咯烷酮 K360100g
12-254Stb14 菌種1mL
M13 噬菌體單鏈基因組 DNAout50 次
一管式拭子 DNAout20 次
28重組蛋白(病毒)--
脂質(zhì)氧化 (MDA) 檢測試劑盒100 次
Hoechst33258 干粉10mg
疊氮25g
刀豆球蛋白 A Ⅲ50mg
CAS57-33-0戊巴比妥5g
17- μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 盒裝已滅菌 )100 支
大提柱式藻類 RNAout5次
DTT,蛋白5g
131032-100人基因組 DNA,女性100μg
23-0110-100Camptothecin( 喜樹堿 )100μL
120630-25Fluorescein-12-dUTP 溶液,1mM25μL
JM107 菌種1mL
131236-250牛血清白蛋白封堵液250mL
Rosetta-gami B(DE3) 菌種1mL
非凍型拭子病毒保存液100mL
CAS1523-11-1#NAME?5g
60702-100RNase-free SDS 溶液 ,10%100mL
石蠟包埋組織 RNAout30 次
瓊脂糖100g