詳細(xì)介紹
Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B-Cas9-588圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱(chēng) Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B-Cas9-588圖片
形態(tài)特性 上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使HEC-1B細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo,經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆,經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白,可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS;400ug/ml G418
傳代方法 消化3-5分鐘;1:2傳代;3天內(nèi)可長(zhǎng)滿(mǎn)。
傳代情況 C3
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR Amelogenin:x,x;CSF1PO:10,12;D12S391:18,19;D13S317:11,11;D16S539:11,12;D18S51:16,20;D19S433:13,13;D21S11:30,31;D2S1338:18,19;D3S1358:15,15;D5S818:11,13;D6S1043:12,18;D7S820:9,11;D8S1179:13,14;FGA:21,21;Penta E:11,11;TH01:6,7;TPOX:8,11;vWA:18,18;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買(mǎi)到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以?xún)?nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶(hù)手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶(hù)提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀(guān)察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀(guān)察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
60803-50可保種型藍(lán)白 T 載體50ng
L-Canavanine(iNOS 抑制劑 )20mg
Sodium orthovanadate( 磷酸酯酶抑制劑 )2g
130675-250核糖核酸酶 HII250U
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 中 pH)30 次
酚 - 混合液 (DNA 提取 )100mL
DNA 探針變性液10mL
青鏈霉素溶液100mL
CAS37326-33-3透明質(zhì)酸酶100mg
80904-5大提柱式真菌 RNAout5次
DNA 促旋酶 (E.coli)100U
dITP 溶液,2.5mM2mL
140626-50細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V-APC)50 次
19-0140-500McCoy's5A 培養(yǎng)基 ( 含 1% 雙抗 +10% 小牛血清 )500mL
70303-1.5綠如藍(lán)核酸染料 (UV)1.5mL
谷氨酰胺測(cè)試盒48 T
雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V-APC·7-AAD) 20 次
23-0650-1SB203580(p38MAPK 抑制劑 )1mg
胎盤(pán)堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒100 次
維生素 B110g
天狼猩紅5g
RNase A 溶液,10mg/mL1.5mL
120623-500β- 瓊脂糖酶Ⅰ500U
乙酰丁香酮1gEJ(人膀胱細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
LB瓊脂/LB Agar大腸桿菌增殖250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
葡萄糖銨培養(yǎng)基/Ammonium Dextrose Medium志賀氏菌的葡萄糖銨試驗(yàn)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
PA319(人大腸細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小鼠腎系膜細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
人腦微血管內(nèi)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠腸微血管細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
RKO-AS45-1(人結(jié)腸轉(zhuǎn)基因細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞gersion
GNM(人口腔鱗頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
Hela S3(人宮頸細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
黃芪甲苷規(guī)格:100mg/支;98%
糖發(fā)酵管BR20支國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
SF-295(人XG惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HPAC(人胰腺腺泡上)5×106cells/瓶×2
LBS瓊脂/酸菌選擇性瓊脂/LBS Agar用于酸桿菌的檢測(cè)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
葡萄球菌增菌肉湯/Staphylococcus Enrichment Broth凝固酶陽(yáng)生葡萄球菌選擇性增菌250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
PC-3M(人前列腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小鼠腎小管上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
人內(nèi)臟脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL