Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人食管癌細(xì)胞；EC109-Cas9-570價(jià)格售后：收到細(xì)胞后7天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問(wèn)題（如污染，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)，應(yīng)出具書(shū)面質(zhì)量問(wèn)題報(bào)告并及時(shí)傳真致銷(xiāo)售人員，我們將盡快為您解決。

Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人食管癌細(xì)胞；EC109-Cas9-570價(jià)格質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶(hù)手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶(hù)提供一次。

Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人食管癌細(xì)胞；EC109-Cas9-570價(jià)格操作步驟：

1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱(chēng)
形態(tài)特性  上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使EC109細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法  1:3傳代；2~3天1次。
傳代情況 C3
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：x,x；CSF1PO：10,10；D12S391：19,20；D13S317：11,11；D16S539：12,12；D18S51：12,16；D19S433：13,13；D21S11：30,30；D2S1338：17,20；D3S1358：17,17；D5S818：12,12；D6S1043：13,13；D7S820：8,12；D8S1179：13,14；；FGA：25,25；Penta E：16,16；TH01：9,9；TPOX：8,8；vWA：16,17；
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類(lèi)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

Origami(DE3) 菌種1mL
51206-5000Taq DNA 聚合酶5000U
120668J-14mL DNA 離心超濾管 (300-500 KD)1個(gè)
蘇丹 B5g
大提柱式細(xì)菌 RNAout5次
酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒20 次
Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10
17-0240XbaI1500U
131165-104× 核酸液相雜交液10mL
糖蛋白 PAGE 染液1套
多粘菌素 B 硫100mg
動(dòng)植物總蛋白微量提取試劑盒50 次
G(5′)ppp(5′)G 帽結(jié)構(gòu)類(lèi)似物25 OD
60908質(zhì)粒（載體）列表2 μg
130832-20天凈沙通用型MLPA 試劑盒20 次
無(wú)內(nèi)毒素槍頭，200 μL1盒
GSH( 抗氧化劑 )1g大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
NCTC 1469(小鼠正常肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2gersion
CNE-2Z(人鼻咽細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
吳茱萸次堿規(guī)格： 20mg/支；98%
MCP瓊脂/產(chǎn)氣莢膜梭菌瓊脂/MCP Agar產(chǎn)氣莢膜梭菌的計(jì)數(shù)和培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
人大細(xì)胞肺細(xì)胞英文名稱(chēng)：NCI-H661
匹克氏肉湯基礎(chǔ)/匹克氏肉湯基礎(chǔ)A/Picks Broth Base/Pick，s Broth Base A溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
SW-13(人腎上腺質(zhì)細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
FO(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HBZY-1(大鼠腎小球系膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人腺細(xì)胞英文名稱(chēng)：Hs 578T
鵝去氧膽酸/CDCABR，98%5/25/100克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
MDA-MB-436(人腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
5637(人膀胱細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人腎動(dòng)脈內(nèi)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠腎管狀上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
CTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L](小鼠成纖維5×106cells/瓶×2gersion
CoC1/DDP(人卵巢耐藥細(xì)胞亞株)5×106cells/瓶×2
NTM培養(yǎng)基/NTM Medium淋球菌的分離培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
多粘菌素 B 硫100mg
兩管式 RT-PCR 試劑盒 (AMV-Taq)50 次
CAS57-09-0十六烷基*基溴化銨25g
140382-10AGL1 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL