Cas9穩(wěn)定表達的人胰腺癌細胞；PANC-1-Cas9-555圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱Cas9穩(wěn)定表達的人胰腺癌細胞；PANC-1-Cas9-555圖片
形態(tài)特性  上皮樣；多角形
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞是采用慢病毒感染的方式使PANC-1細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法  1:2~1:4傳代；每周2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：x,x；CSF1PO：10,12；D12S391：22,22；D13S317：11,11；D16S539：11,11；D18S51：12,12；D19S433：11,16；D21S11：28,28；D2S1338：23,24；D3S1358：17,17；D5S818：11,13；D6S1043：11,12；D7S820：8,10；D8S1179：14,15；FGA：21,21；；Penta E：7,14；TH01：7,8；TPOX：8,11；vWA：15,15；
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

磷酸化蛋白純化試劑盒50 次
牛血紅蛋白5g
Taq DNA 聚合酶5000U
*0F' 菌種1mL
90205-500RNase A 干粉500mg
130833-1LAMP 可見光染料1mL
微球菌核酸酶5000U
HMS174（DE3）菌種1mL
甜菜堿鹽酸鹽100g
酸水解酪素100g
CAS68988-92-1瑞氏色素5g
21-0050-5動物上皮細胞生長因子5mL
111201-50痰液 DNAout50 次
RAPD PCR 試劑盒 ( 含銀染 )100 次
DEAE 葡聚糖凝膠 A-2525g
96 孔板血液 DNAout( 真空法 )5次
Tma 核酸內(nèi)切酶 III500U
CAS6976-37-0雙 (2- 羥乙基 ) 亞氨基三 ( 羥甲基 ) 甲烷5g
12-268GS200 酵母菌種1mL
一氧化氮合成酶測試盒24 T5-Methoxy-pyridin-3-ylamine3-氨基-5-氧基吡啶64436-92-6
(S)-3-Ami-N-Boc-piperidine(S)-1－叔丁氧羰基－3－氨基啶625471-18-3
Boric acid酸11113-50-1
(R)-1-CBZ-3-PYRROLIDINOLR-1-芐氧羰基－羥基吡咯100858-33-1
TRANS-8-METHYL-6-NONENOYL CHLORIDE反-8-基-6-壬酰95636-02-5
Weak Acid Red A弱酸性紅A
Calcium鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液7440-70-2
METHYL RICINOLEATE蓖麻油酸酯141-24-2
Glyoxylic acid乙酸298-12-4
5-IODO-2-METHYLANILINE5-碘-2-基胺83863-33-6
NA5-腺苷一磷酸二(六水)(AMP)
2',4',6'-TRIMETHYLACETOPHENONE三基乙酰丙1667-01-2
Fmoc-N-methyl-D-valineFmoc-N-基-D-纈氨酸103478-58-6
3-Chloro-2,2-dimethyl-1-propanol3--2,2-二基-1-丙醇13401-56-4
2-Methylhydroquinone基氫醌95-71-6
2-Amino-6-bromopurine2-氨基-6-溴嘌呤82499-03-4
2,4-Dimethylbenzoic acid2,4-二基酸611-01-8
FMOC-L-IsoleucineFmoc-L-異亮氨酸71989-23-6
Palladium diacetate醋酸鈀3375-31-3
ACETYLCHOLINE IODIDE碘化乙酰膽2260-50-6