Cas9穩(wěn)定表達的人乳腺癌細胞；MCF7-Cas9-543圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 Cas9穩(wěn)定表達的人乳腺癌細胞；MCF7-Cas9-543圖片
形態(tài)特性  上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞是采用慢病毒感染的方式使MCF7細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法  1:3~1:6傳代；每周2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：x,x；CSF1PO：10,10；D12S391：18,20；D13S317：11,11；D16S539：11,12；D18S51：14,14；D19S433：13,14；D21S11：30,30；D2S1338：21,23；D3S1358：16,16；D5S818：11,12；D6S1043：12,18；D7S820：8,9；D8S1179：10,14；FGA：23,24,25；Penta E：7,12；TH01：6,6；TPOX：9,12；vWA：14,15
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

戊二醛二甲酸緩沖固定液250 mL
CAS9005-64-5吐溫 -20100mL
19-0071-500F12K 液體培養(yǎng)基 ( 無血清和雙抗 )500mL
120522-50柱式血液 DNA-RNAout50 次
瓊脂糖100g
D(+) 木糖5g
大提柱式真菌 RNAout5次
一步式 RT-PCR Mix 1mL
131096-1生物素化的堿性磷酸酶 (AP)1mg
100931-100ROX 參考染料 II100μL
UTP 溶液，2.5mM2mL
非凍型尿液 DNA 保存液15mL
牛胰島素25mg
碘化丙啶干粉10mg
CAS50-81-7抗壞血酸25g
130859A-10M13mp18DNA10μg
硝酸纖維素膜，13×20cm1張Bis-(triphenylphosphino)-cuprous borohydride雙(三基膦)氫化亞銅16903-61-0
Nitroethane基乙烷79-24-3
DL-2-AMINOPROPIONIC ANHYDRIDE丙氨酸酐5625-46-7
1-PHENYL-3-CHLORO-1-PROPYNE1-基-3--1-3355-31-5
NAB27
DI-N-HEXYLAMINE二正己胺143-16-8
METHYL 2-BROMO-5-CHLOROBENZOATE2-溴-5-酸酯27007-53-0
2-Piperidineethanol2-啶乙醇1484-84-0
Methyl cyclopentylacetate環(huán)基乙酸酯2723-38-8
2-(ALLYLOXY)TETRAHYDROPYRAN2-丙氧基四氫吡喃4203-49-0
N-FormylmorpholineN-酰啉4394-85-8
NAD-殼聚糖
4'-Hydroxypropiophenone4-羥基丙70-70-2
N-METHYL-L-PROLINE MONOHYDRATE 98N-基-L-脯氨酸,一水199917-42-5
(R)-(+)-1-Phenylethanol(R)-(+)-1-基乙醇1517-69-7
DYSPROSIUM CHLORIDE化鏑(III)10025-74-8
4-chloro-2-methylbenzenesulfonyl chloride4--2-基磺酰56157-92-7
2,4-Difluorobenzophenone2,4-二二85068-35-5
Cupferron銅鐵試劑135-20-6
DIMETHYL 2,6-PYRIDINEDICARBOXYLATE2,6-吡啶二酸二酯5453-67-8
固相內(nèi)毒素清除劑500g
聚乙二醇 3350250g
玻璃珠法柱式酵母 DNAout50 次
CAS620-45-12,6- 二氯酚靛酚1g