Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人肺癌細(xì)胞；A549-Cas9-538說明書采用干冰保存運(yùn)輸。收到細(xì)胞時，若干冰已經(jīng)*融化，請立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)；若尚留有干冰，請立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用，請按條件貯存細(xì)胞，切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。

Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人肺癌細(xì)胞；A549-Cas9-538說明書現(xiàn)貨直銷，免費(fèi)快遞送貨上門。公司供應(yīng)各種細(xì)胞株，細(xì)胞系，種類齊全，現(xiàn)貨，質(zhì)量保證，公司所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。使用前仔細(xì)閱讀本說明書。

產(chǎn)品名稱	Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人肺癌細(xì)胞；A549-Cas9-538說明書
用途	僅用科研
保存條件	4℃保存一年;-20℃長期保存

細(xì)胞名稱
形態(tài)特性  上皮樣；多角形
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使A549細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 
培養(yǎng)條件  McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法  1:3~1：8傳代；每周2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：X,Y；CSF1PO：10,12；D12S391：18,19；D13S317：11,11；D16S539：11,12；D18S51：14,17；D19S433：29,29；D21S11：29,29；D2S1338：24,24；D3S1358：16,16；D5S818：11,11；D6S1043：11,13；D7S820：8,11；D8S1179：13,14；FGA：23,23；Penta E：7,11；TH01：8,9.3；TPOX：8,11；vWA：14,14；
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
運(yùn)輸保存：
采用干冰保存運(yùn)輸。收到細(xì)胞時，若干冰已經(jīng)*融化，請立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)；若尚留有干冰，請立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用，請按條件貯存細(xì)胞，切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。
保存條件：4℃保存一年;-20℃長期保存
用途：只可用于科研。
儲存：液氮。
運(yùn)輸：干冰(第二代培養(yǎng)末期液氮凍存)。
細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。
注意：*次植入后，在6-16小時內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡細(xì)胞。到達(dá)客戶手中，出現(xiàn)任何問題（人為或者非人為），導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。對于細(xì)胞的真實(shí)性，支持客戶檢測對應(yīng)的biomarker，（如證明細(xì)胞錯誤，全額退款。）公司針對每株細(xì)胞，鑒定gene background，鑒定完成的細(xì)胞可以提供數(shù)據(jù)，用于證明細(xì)胞的真實(shí)性，并且?guī)椭蛻舾嗟牧私饧?xì)胞特性。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。M15 菌種1mL
2,4- 二氯苯氧5g
神經(jīng)氨酸酶檢測試劑盒100 次
通用型 LAMP 試劑盒50 次
131276-250Baker 甲醛鈣中性固定液250 mL
130971-50柱式病毒 RNA-DNA 雙提試劑盒50 次
鳥嘌呤5g
96 孔板病毒 DNAout( 離心法 )1次
DiI( 細(xì)胞膜紅色熒光探針 )10mg
硝酸纖維素膜，13×20cm1張
22-0270-10DiO( 細(xì)胞膜綠色熒光探針 )10mg
3660-250非凍型組織 DNA 保存液250mL
葡聚糖凝膠 G-50 中顆粒25g
苯酚紅5g
U0126(MEK1/2 抑制劑 )1mg
核酸外切酶 I750U
23-0840-1Z-VAD-FMK(Caspase Inhibitor)1mg
70702-50分枝桿菌 DNAout50 次
Rosetta 菌種1mL
超氧化物歧化酶測試盒48 TDibutyltin maleate二丁基馬來酸錫1978/4/6
DIFORMYLIMIDE SODIUM SALT二酰氨基18197-26-7
5-Bromo-2-fluorobenzonitrile5-溴-2-179897-89-3
Potassium methoxide醇鉀865-33-8
DL-HomoserineDL-高絲氨酸1927-25-9
2-Fluoro-4-nitrotoluene2--4-基1427-07-2
4-NITROPHENYL-N-ACETYL-BETA-D-GLUCOSAMINIDE4-基基-2-乙酰氨基-2-脫氧-β-D-吡喃葡萄糖苷3459-18-5
SINIGRIN MONOHYDRATE介子苷64550-88-5
beta-Diphosphopyridine nucleotide煙酰胺腺嘌呤雙核苷酸53-84-9
Cyclobutylamine環(huán)丁基胺2516-34-9
NAtris 乙酸
1-Boc-4-(aminomethyl)piperidine4-氨基基-1-Boc-啶144222-22-0
(5E,9E)-6,10,14-Trimethylpentadeca-5,9,13-trien-2-one法尼基丙1117-52-8
2-Bromo-2-methylpropionic acid2-溴代異丁酸2052/1/9
N-AcetylethylenediamineN-乙?；?001-53-2
Twofold Lactose Bile Salt Broth雙料乳糖膽胨水
CALCIUM PYROPHOSPHATE焦磷酸鈣7790-76-3
CHLOROXURON枯草隆1982-47-4
Abscisic acid脫落酸14375-45-2
CHLOROFORM-D氘代仿-d865-49-6
(+/-)1-(1-Naphthyl)ethylamine1-萘乙胺42882-31-5
6-Undecanone6-十一927-49-1
Xylene Cyanole FF二FF2650-17-1
1-TRIMETHYLSILYLMETHANOL三基硅基醇3219-63-4
DEPC 水100mL
大鼠內(nèi)皮細(xì)胞分離液 1.066200mL
18-0210-48超氧化物歧化酶測試盒48 T
101218-100DNA  Tris Base( 三羥甲基氨基甲烷 )100g