詳細(xì)介紹
人子宮內(nèi)膜低分化腺癌細(xì)胞;EAG3圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人子宮內(nèi)膜低分化腺癌細(xì)胞;EAG3圖片
形態(tài)特性 上皮樣;多角形
生長特性 貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS
傳代方法 1:2傳代,3天傳代一次
傳代情況 P21
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+36%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
角質(zhì)細(xì)胞生長因子 - 不含 BPE5mL
L- 甲硫氨酸25g
ECL 法生物素雜交檢測試劑盒5次
CAS3150-24-1對硝基苯 -β-D- 吡喃半乳糖苷1g
130584-1000小鼠抗 T7 標(biāo)簽單抗1000μL
植物種屬鑒定 PCR Mix 1100 次
L- 蘋果酸25g
蘇丹Ⅲ5g
超敏化學(xué)發(fā)光(HRP)檢測試劑盒 2.0 50mL
CAS112926-00-8變色硅膠50g
100909-200長效期 SDS-PAGE 配膠液200mL
柱式質(zhì)粒 DNAout50 次
魯米諾1g
梭菌蛋白酶10μg
H5N1 神經(jīng)氨酸酶抑制劑鑒定試劑盒100 次 Anthraquinone蒽醌84-65-1
Propyl 4-hydroxy-3-iodobenzoate4-羥基-3-碘酸丙酯15126-08-6
1-Indanone1-茚83-33-0
Nalpha-Fmoc-L-tyrosineFmoc-L-酪氨酸92954-90-0
Methyl 2,5-dihydroxybenzoate2,5-二羥基酸酯2150-46-1
5-METHOXY-2-METHYLINDOLE5-氧基-2-基吲哚1076-74-0
Tetracaine丁卡因94-24-6
3-Cyanobenzoic acid3-基酸1877-72-1
DL-Arginine hydrochloride monohydrateDL-精氨酸酸(一水)32042-43-6
4-Nitrophenyl isocyanate異酸對基100-28-7
Vinyltrimethoxysilane乙基三氧基硅烷2768/2/7
NA(R)-2-四氫萘胺
FRAXINELLONE梣28808-62-0
MONALIDE庚酰草胺7287-36-7
lurium tetrachloride四化碲10026-07-0
FMOC-CYS(ACM)-WANG RESINFMOC-CYS(ACM)-WANG RESIN
3-Methylphenethyl alcohol3-基乙醇1875-89-4
Harpagoside哈巴俄苷19210-12-9
Ethyl (trimethylsilyl)acetate三基硅乙酸乙酯4071-88-9
3,4',5-TRIMETHOXY-TRANS-STILBENE白藜蘆醇三22255-22-7
Dibenzothiophene二并噻吩132-65-0
4-Fluorophenethyl alcohol對乙醇7589-27-7
CAS9001-12-1膠原酶Ⅰ型100mg
131150-100山羊抗小鼠 IgG(H+L),辣根過氧化物酶標(biāo)記100μL
80929-250液體樣品 RNAout250 次
N- 三 ( 羥甲基 ) 甲基 -2- 氨基乙烷磺酸5g
4mL DNA 離心超濾管 (150-250 KD)1個
前脂肪細(xì)胞生長因子5mL