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人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；BT-549 圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；BT-549 圖片
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細(xì)胞1978年由W.G. Coutinho 和 E.Y. Lasfargues建系，源自一位72歲患有乳腺導(dǎo)管癌的白人女性，來源組織包括乳頭及浸潤導(dǎo)管。該細(xì)胞形態(tài)包括上皮樣細(xì)胞及多核巨細(xì)胞，可分泌一種粘性物質(zhì)。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；0.023IU/ml insulin
傳代方法  1:2～1:6傳代，2～3天換液一次
傳代情況 P48
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：X；CSF1PO： 10，12；D13S317：11；D16S539：8；D18S51：15；D19S433：15.2；D21S11：32.2；D2S1338：17；D3S1358：18；D5S818：11；D7S820：9，10；D8S1179：14，16；FGA：19；TH01：9.3；TPOX：8；vWA：15；
同工酶 
染色體  73～80，XX
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

CAS110-18-9四甲基乙二胺25mL
12-44TG1 菌種1mL
一步法質(zhì)粒 DNAout 2.050 次
基因轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑0.5 mL
甘氨酸二肽10g
脈沖電泳 Marker( 酵母染色體 PFG)50 次
CAS288-32-4咪唑10g
131008-100RIPA 裂解液 ( 弱 )100mL
熒光增白劑 281g
菌落 PCR 試劑盒 2.050 次
黃嘌呤1g
CTP 溶液，2.5mM2mL
CAS9008-97-3植物血球凝集素 P5mgDIPROPYLENETRIAMINE二丙三胺56-18-8
Tosyl isocyanate對基磺酰異酸酯4083-64-1
3-Methoxybutyl acetate乙酸3-氧基丁酯4435-53-4
VITAMIN A68-26-8
Disodium succinate hexahydrate丁二酸二(六水)6106-21-4
5-Nitrouracil5-基尿嘧啶611-08-5
Rhodium銠標(biāo)準(zhǔn)溶液7440-16-6
2-Thiophenecarbonyl chloride2-噻吩酰5271-67-0
NAOV-101色譜固定液
6-Amino-2-chloropurine riboside2-腺嘌呤核苷146-77-0
NEOBAVAISOFLAVONE新補(bǔ)骨脂異黃
(S)-1,2,4-Butanetriol(S)-(-)-1,2,4-丁三醇42890-76-6
1-Naphthalenesulfonyl chloride1-萘磺酰85-46-1
NA正庚基硫
Poly(1-vinylpyrrolidone-co-vinyl acetate)乙基吡咯烷-乙酸乙酯共聚物25086-89-9
Z-PRO-NH2Cbz-L-脯氨酸酰胺34079-31-7
Methyl coumalate香豆靈酸酯6018-41-3
Trimethoxy(methyl)silane基三氧基硅烷1185-55-3
Cyproterone環(huán)丙孕2098-66-0
Betulinic acid白樺脂酸472-15-1
131080-1重組蛋白 G1mg
柱式 DNA 膠回收試劑盒50 次
Long-Taq DNA 聚合酶500U
木瓜蛋白酶5g
Caspase 2 檢測試劑盒50 次
CAS298-93-1噻唑蘭250mg
100811-10質(zhì)譜兼容型蛋白銀染試劑盒10 次
β- 半乳糖苷酶檢測試劑盒300 次