EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMYF圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMYF圖片
形態(tài)特性  淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性  該細胞系來源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS
傳代方法  1:2傳代；5-6天一次
傳代情況 P3
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

柱式血清血漿 RNAout    50 次
柱式血液 DNAout    200 次
柱式血液 DNAout    50 次
柱式血液 DNA-RNAout    50 次
柱式血液 mtDNAout，測序    10 次
柱式血液 RNAout    50 次
柱式藻類 RNAout    50 次
柱式真菌 DNAout    50 次
柱式真菌 RNA-DNA 雙提試劑盒    50 次
柱式真菌 RNAout    50 次
柱式植物 DNAout    50 次
柱式植物 mtDNAout，測序    10 次
柱式植物 RNA-DNA 雙提試劑盒    50 次
柱式植物 RNAout    50 次
柱式植物 RNAout 2.0    50 次
柱式植物葉綠體 DNAout    15 次
柱式植物油 DNAout    50 次Cannabidiolic Acid （exempt preparation） （1 mg）CBDA|β-Resorcylic Acid； 2,4-dihydroxy-3-[（1R,6R）-3-methyl-6-（1-methylethenyl）-2-cyclohexen-1-yl]-6-pentyl-benzoic acid
Fialuridine （25 mg）5-Iodo-2’-Fluoroarauracil|FIAU|Fluoroiodoarauracil|NSC 678514； 1-（2-deoxy-2-fluoro-β-D-arabinofuranosyl）-5-iodo-2,4（1H,3H）-pyrimidinedione
5-Cyano-2,3-di-（p-tolyl）tetrazolium （chloride） （100 mg）CTC|Cyanotolyl Tetrazolium Chloride； 5-cyano-2,3-bis（4-methylphenyl）-2H-tetrazolium, monochloride
MMB2201 （1 mg）I-AMB； methyl （1-（5-fluoropentyl）-1H-indole-3-carbonyl）-L-valinate
Camostat （mesylate） （5 mg）FOY 305|Foipan； 2-（dimethylamino）-2-oxoethyl ester, 4-[[4-[（aminoiminomethyl）amino]benzoyl]oxy]-benzeneacetic acid, monomethanesulfonate
Prothionamide （1 g）Tebeform； 2-propyl-4-pyridinecarbothioamide
5-hydroxy Tryptophol （10 mg）NSC 84416； 5-hydroxy-1H-indole-3-ethanol
17α,20β-Dihydroxy-4-pregnen-3-one （5 mg）17α,20β-DHP|17α,20β-dihydroxy Progesterone； 17,20R-dihydroxy-pregn-4-en-3-one
NU 6027 （1 mg）6-（cyclohexylmethoxy）-5-nitroso-2,4-pyrimidinediamine
ATB-346 （10 mg）4-
PBIT （1 mg）2-
O6-Benzylguanine （10 mg）NSC 637037； 6-（phenylmethoxy）-9H-purin-2-amine
AB-CHMINACA metabolite M2 （5 mg）N-[[1-（cyclohexylmethyl）-1H-indazol-3-yl]carbonyl]-L-valine
4-Chloromethcathinone （hydrochloride） （5 mg）4-CMC|Clephedrone； 1-
1,2-O-Dioctadecyl-rac-glycerol （250 mg）2,3-bis（octadecyloxy）-1-propanol
TropicamideRo 1-7683； N
柱式質(zhì)粒 DNAout    100 次
柱式質(zhì)粒 DNAout    50 次
離心管 ( 配研磨杵用 )     1000 只
離心管 ( 配研磨杵用 )     50 只