人肝永生化細(xì)胞；THLE-3說明書采用干冰保存運(yùn)輸。收到細(xì)胞時，若干冰已經(jīng)*融化，請立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)；若尚留有干冰，請立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用，請按條件貯存細(xì)胞，切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。

人肝永生化細(xì)胞；THLE-3說明書現(xiàn)貨直銷，免費(fèi)快遞送貨上門。公司供應(yīng)各種細(xì)胞株，細(xì)胞系，種類齊全，現(xiàn)貨，質(zhì)量保證，公司所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。使用前仔細(xì)閱讀本說明書。

產(chǎn)品名稱	人肝永生化細(xì)胞；THLE-3說明書
用途	僅用科研
保存條件	4℃保存一年;-20℃長期保存

細(xì)胞名稱
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞
生長特性 貼壁生長
特征特性  THLE-2 (ATCC CRL-10149 和 THLE-3 (ATCC CRL-11233)細(xì)胞系是正常肝細(xì)胞用SV40大T抗原轉(zhuǎn)染得到。 將含有SV40 T抗原的Bgl I-Hpa I片段的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入兼嗜性包裝細(xì)胞株P(guān)A317中病毒。 THLE-2 and THLE-3表達(dá)正常成人肝上皮細(xì)胞特征性的表型。 當(dāng)注射到無胸腺裸鼠中時，它們不成瘤，具有接近二倍體的核型，不表達(dá)甲胎蛋白。 THLE-2 and THLE-3將benzo[a]pyrene, N-nitrosodimet 
培養(yǎng)條件   Clonetics Corporation, Walkersville, MD 21793的BEGM培養(yǎng)基(目錄號CC3170)。 套裝包含了500毫升基本培養(yǎng)基及分別凍存的添加劑，我們不用其中的GA和Epinephrine但另外添加了5 ng/ml EGF, 70 ng/ml Phosphoethanolamine。
傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件  *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
運(yùn)輸保存：
采用干冰保存運(yùn)輸。收到細(xì)胞時，若干冰已經(jīng)*融化，請立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)；若尚留有干冰，請立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用，請按條件貯存細(xì)胞，切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。
保存條件：4℃保存一年;-20℃長期保存
用途：只可用于科研。
儲存：液氮。
運(yùn)輸：干冰(第二代培養(yǎng)末期液氮凍存)。
細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。
注意：*次植入后，在6-16小時內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡細(xì)胞。到達(dá)客戶手中，出現(xiàn)任何問題（人為或者非人為），導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。對于細(xì)胞的真實性，支持客戶檢測對應(yīng)的biomarker，（如證明細(xì)胞錯誤，全額退款。）公司針對每株細(xì)胞，鑒定gene background，鑒定完成的細(xì)胞可以提供數(shù)據(jù)，用于證明細(xì)胞的真實性，并且?guī)椭蛻舾嗟牧私饧?xì)胞特性。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。戊巴比妥鈉    5g
戊二醛，25% 水溶液    10mL
戊二醛二甲鈉緩沖固定液    250 mL
戊二醛磷酸緩沖固定液    250 mL
X 光片 (5×7 英寸 )    1盒
X 光片 (8×10 英寸 )    1盒
X33 酵母菌種    1mL
Xa 因子蛋白酶    25μg
Xa 因子蛋白酶    50μg
XbaI    1500U
X-Gal 干粉    0.5g
X-Gal 溶液，20mg/mL    10mL
XhoI    2000U
XL-10 gold 菌種    1mL
XL10-Gold 感受態(tài)細(xì)胞    0.1 mL×10
REV 5901 （10 mg）。alpha。-pentyl-3-（2-quinolinylmethoxy）-benzenemethanol； REV 5901
LY171883 （100 mg）1-[2-hydroxy-3-propyl-4-[4-（1H-tetrazol-5-yl）butoxy]phenyl]-ethanone； LY171883
CAY10401 （500 ug）1-oxazolo[4，5-b]pyridin-2-yl-9-octadecyn-1-one； CAY10401
Colorimetric COX Assay Potassium Hydroxide （1 ea）Potassium Hydroxide； Colorimetric COX Assay Potassium Hydroxide
L-Thiocitrulline （hydrochloride） （500 mg）N5-（aminothioxomethyl）-L-ornithine （dihydrochloride）； L-Thiocitrulline （hydrochloride）
Peroxynitrite （1 ml）peroxynitrous acid， sodium salt； Sodium Peroxynitrite； Peroxynitrite
DAN-1 EE （hydrochloride） （10 mg）4-[[（3-amino-2-naphthalenyl）amino]methyl]-benzoic acid， ethyl ester， monohydrochloride； DAN-1 EE （hydrochloride）
Prostaglandin A1 methyl ester （5 mg）15S-hydroxy-9-oxo-prosta-10，13E-dien-1-oic acid， methyl ester； PGA1 methyl ester； Prostaglandin A1 methyl ester
Prostaglandin E2-PEG11-biotin （50 ug）11α，15S-dihydroxy-9-oxo-prosta-52，13E-dien-1-oyl-polyethylene glycol 11-N’-biotinoyl-1，5-diaminopentane； PGE2-PEG11-biotin； Prostaglandin E2-PEG11-biotin
Stearoyl Serotonin （25 mg）N-[2-（5-hydroxy-1H-indol-3-yl）ethyl]-octadec*； Stearoyl Serotonin
3-Deaza-2’-deoxyadenosine （10 mg）1-（2-deoxy-β-D-erythro-pentofuranosyl）-1H-imidazo[4，5-c]pyridin-4-amine； c3dA； 3-Deaza-2’-deoxyadenosine
AS-605240 （potassium salt） （5 mg）5-（6-quinoxalinylmethylene）-2，4-thiazolidinedione， monopotassium salt； AS-605240 （potassium salt）
XL1-Blue 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞    0.1mL×10
XL1-Blue 菌種    1mL
XL2-Blue 感受態(tài)細(xì)胞    10×100μL
XTT 細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性檢測試劑盒    500 次
吸附樹脂 XAD7    100g