詳細(xì)介紹
人胚腎細(xì)胞-F克??;293F圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人胚腎細(xì)胞-F克??;293F圖片
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長;懸浮生長
特征特性
培養(yǎng)條件 懸浮培養(yǎng)用特制無血清培養(yǎng)基;貼壁培養(yǎng)用MEM-EBSS + NEAA + 10%FBS
傳代方法
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:7,12;D13S317:12,14;D16S539:,9,13;D18S51:17,18;D6S1043:11;D21S11:28,30.2;D2S1338:19;D3S1358:15,17;D5S818:8,9;D7S820:11;D8S1179:12,14;FGA:23;Penta E:15;vWA:16,19;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
T7 DNA 聚合酶 ( 未修飾 ) 300U
T7 RNA 聚合酶 1000U
T7 RNA 聚合酶 25000U
T7 核酸內(nèi)切酶 I 250U
T7 核酸外切酶 1000U
T7 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒 50 次
T7 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒 50 次
TAE 電泳液 ,50× 250mL
TAE 電泳液 ,50× 2500mL
Taq DNA 聚合酶 500U
Taq DNA 聚合酶 5000U
Taq DNA 連接酶 1000U
Taq 酶抗體 1000U
Taq 酶抗體 250U
TB1 感受態(tài)細(xì)胞 10×100μL
TB1 菌種 1mL
TBE 電泳液 ,10× 250mL
TBE 電泳液 ,10× 2500mLMMB2201 (5 mg)I-AMB; methyl (1-(5-fluoropentyl)-1H-indole-3-carbonyl)-L-valinate
Zalcitabine (100 mg)2’,3’-Dideoxycytidine|Hivid|NSC 606170|Ro 24-2027/000|ddC; 2’,3’-dideoxy-cytidine
Prothionamide (5 g)Tebeform; 2-propyl-4-pyridinecarbothioamide
5-hydroxy Tryptophol (25 mg)NSC 84416; 5-hydroxy-1H-indole-3-ethanol
Coenzyme A (100 mg)CoA; coenzyme A
NU 6027 (5 mg)6-(cyclohexylmethoxy)-5-nitroso-2,4-pyrimidinediamine
ATB-346 (5 mg)4-
PBIT (25 mg)2-
O6-Benzylguanine (50 mg)NSC 637037; 6-(phenylmethoxy)-9H-purin-2-amine
AB-CHMINACA metabolite M3A (5 mg)(1-((4-hydroxycyclohexyl)methyl)-1H-indazole-3-carbonyl)-L-valine
GSK-LSD1 (hydrochloride) (1 mg)N-[(1R,2S)-2-phenylcyclopropyl]-4-piperidinamine, dihydrochloride
n-Dodecyl-β-D-maltoside (1 g)DDM|Dodecyl Maltoside; dodecyl 4-O-α-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranoside
BIBR 1532omerase Inhibitor X; 2-[[(2E)-3-(2-naphthalenyl)-1-oxo-2-buten-1-yl]amino]-benzoic acid
PacritinibSB 1518; 11-[2-(1-pyrrolidinyl)ethoxy]-14,19-dioxa-5,7,27-triazatetracyclo[19.3.1.12,6.18,12]heptacosa-1(25),2,4,6(27),8,10,12(26),16E,21,23-decaene
OxolinicNSC 110364|Urinox; 5-ethyl-5,8-dihydro-8-oxo-1,3-dioxolo[4,5-g]quinoline-7-carboxylic acid
BRD73954 (10 mg)N1-hydroxy-N3-(2-phenylethyl)-1,3-benzenedicarboxamide
Asterric Acid (5 mg)Dimethylosoic Acid|RES-1214-1|TAN 1415A; 2-(2-carboxy-3-hydroxy-5-methylphenoxy)-5-hydroxy-3-methoxy-benzoic acid, 1-methyl ester
N1-Acetylspermidine (hydrochloride) (1 mg)N1-AcSPD; N-[3-[(4-aminobutyl)amino]propyl]-acetamide, dihydrochloride
TCEP 溶液,0.5M 5mL
TCEP 鹽酸膦 1g
TdT 加尾法 DNA 標(biāo)記試劑盒 5次
TdT 加尾法 DNA 地高標(biāo)記試劑盒 5次