詳細(xì)介紹
人皮膚成纖維細(xì)胞;HSAS4圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人皮膚成纖維細(xì)胞;HSAS4圖片
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系來(lái)源于一男性的皮膚組織。2005年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法(-)
STR Amelogenin:XY;D8S1179:11,13;D21S11:29,31;D7S820:10,11;CSF1PO:10,13;D3S1358:16;TH01: 9;D13S317:8,11;D16S539: 12;D2S1338:20,21;D19S433:13;vWA:14,18;THOX:8, 11;D18S51:15,17;D5S818:11, 12;FGA:21,24。
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
羥基脲 1g
羥脯氨酸測(cè)試盒 ( 消化法 )( 測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞、培養(yǎng)液 ) 48 T
羥脯氨酸測(cè)試盒( 堿水解法 )( 測(cè)動(dòng)物血清、組織、尿液 ) 48 T
親和層析柱 6 mL
親和層析柱 1 mL
親和層析柱 3 mL
親和層析柱 12 mL
親和層析柱 30 mL
親和層析柱 50 mL
親和硅烷 25mL
親和素 10mg
親和素 1mg
青鏈霉素溶液 100mL
青霉素 G 鉀鹽 1Mu
青霉素 G 鉀鹽溶液 ,200mg/mL 1 Mu
青霉素 G 鈉鹽 1g
青霉素 G 鈉鹽溶液 10mL
氫化可 5g
瓊脂粉 100g
瓊脂糖 100g
瓊脂糖 100g
瓊脂糖凝膠 2B 100mL
瓊脂糖凝膠 4B 100mL
秋水仙素 100mg
秋水仙素溶液 1mL
巰基磁珠 2mL5-hydroxy Tryptophol (5 mg)NSC 84416; 5-hydroxy-1H-indole-3-ethanol
Coenzyme A (25 mg)CoA; coenzyme A
NU 6027 (50 mg)6-(cyclohexylmethoxy)-5-nitroso-2,4-pyrimidinediamine
AWD 131-138 (10 mg)Imepitoin; 1-(4-chlorophenyl)-1,5-dihydro-4-(4-morpholinyl)-2H-imidazol-2-one
PBIT (5 mg)2-
β-Nicotyrine (1 mg)NSC 127943|NSC 407276|α-Nicotyrine; 3-(1-methyl-1H-pyrrol-2-yl)-pyridine
AB-CHMINACA metabolite M3A (500 ug)(1-((4-hydroxycyclohexyl)methyl)-1H-indazole-3-carbonyl)-L-valine
GSK-LSD1 (hydrochloride) (10 mg)N-[(1R,2S)-2-phenylcyclopropyl]-4-piperidinamine, dihydrochloride
n-Dodecyl-β-D-maltoside (5 g)DDM|Dodecyl Maltoside; dodecyl 4-O-α-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranoside
BIBR 1532omerase Inhibitor X; 2-[[(2E)-3-(2-naphthalenyl)-1-oxo-2-buten-1-yl]amino]-benzoic acid
Avagacestat (1 mg)BMS 708163; (2R)-2-[[(4-chlorophenyl)sulfonyl][[2-fluoro-4-(1,2,4-oxadiazol-3-yl)phenyl]methyl]amino]-5,5,5-trifluoro-pent*
OxolinicNSC 110364|Urinox; 5-ethyl-5,8-dihydro-8-oxo-1,3-dioxolo[4,5-g]quinoline-7-carboxylic acid
BRD73954 (5 mg)N1-hydroxy-N3-(2-phenylethyl)-1,3-benzenedicarboxamide
MCC-555 (1 mg)Isaglitazone|Netoglitazone|RWJ 241947; 5-[[6-[(2-fluorophenyl)methoxy]-2-naphthalenyl]methyl]-2,4-thiazolidinedione
曲拉通 X-100 100mL
曲拉通 X-114 100mL