人正常乳腺上皮細胞；MCF 10A圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人正常乳腺上皮細胞；MCF 10A圖片
形態(tài)特性  上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性   
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:2。3天內可長滿。
傳代情況97
凍存條件  基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權限 B類
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內出現(xiàn)任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

DNA  CTAB( 十六烷基*基溴化銨 )    100g
DNA  DTT( 二硫代蘇糖 )    10g
DNA  EDTA 2Na    100g
DNA  EDTA 溶液 ,0.5M,PH8.01     100mL
DNA  Guanidine HCl( 鹽酸胍 )    100g
DNA  GuSCN( 異硫氰酸胍 )    100g
DNA  HEPES( 羥乙基哌乙硫磺酸 )    100g
DNA  PVP K30 溶液，20%    100mL
DNA  PVP K30( 聚乙烯基吡咯烷酮 K30)    100g
DNA  Sarkosyl 溶液，10%    100mL
DNA  Sarkosyl( 十二烷基肌氨酸鈉 )    100g
DNA  SDS 溶液，10%    100mL
DNA  SDS( 十二烷基硫酸鈉 )    100g
DNA  Tris Base( 三羥甲基氨基甲烷 )    100g
DNA  Tris HCl，1M，pH6.5    100mL
DNA  Tris HCl，1M，pH7.0    100mL
DNA  Tris HCl，1M，pH7.5    100mL
DNA  Tris HCl，1M，pH8.0    100mL
DNA  Tris HCl，1M，pH8.5    100mLEpalrestat （25 mg）5Z-[（2E）-2-methyl-3-phenyl-2-propen-1-ylidene]-4-oxo-2-thioxo-3-thiazolidineacetic acid； Kinedak|ONO-2235|Sorbistat； Epalrestat
Fluprostenol-d4 （500 ug）9α，11α，15R-trihydroxy-16-（3-（trifluoromethyl）phenoxy）-17，18，19，20-tetranor-prosta-5Z，13E-dien-1-oic-3，3，4，4-d4 acid； 16-m-trifluoromethylphenoxy tetranor Prostaglandin F2α-d4； Fluprostenol-d4
Inulin Standard （2 mg）Inulin Standard
CP 47，497-C9-homolog （5 mg）cis-5-（1，1-dimethylnonyl）-2-（3-hydroxycyclohexyl）-phenol； CP 47，497-C9-homolog
5-chloro AB-PINACA （1 mg）N-（1-amino-3-methyl-1-oxobutan-2-yl）-1-（5-chloropentyl）-1H-indazole-3-carboxamide； 5-chloro AB-PINACA
Topiramate （500 mg）2，3:4，5-bis-O-（1-methylethylidene）-β-D-fructopyranose 1-sulfamate； Topamax |TPM|Epitomax|McN 4853|RWJ 17021； Topiramate
cis-4,10,13,16-Docosatetraenoic Acid （1 mg）4Z,10Z,13Z,16Z-docosatetraenoic acid
Rofecoxib （500 mg）MK 966|Vioxx； 4-[4-（methylsulfonyl）phenyl]-3-phenyl-2（5H）-furanone
Piperine （100 g）Bioperine|N-Piperoylpiperidin|NSC 21727； （2E,4E）-5-（1,3-benzodioxol-5-yl）-1-（1-piperidinyl）-2,4-pentadien-1-one
（±）9-HEPE （100 ug）（±）-9-hydroxy-5Z，7E，11Z，14Z，17Z-eicosapentaenoic acid； （±）9-HEPE
（±）11-HETE （100 ug）（±）11-hydroxy-5Z，8Z，12E，14Z-eicosatetraenoic acid； （±）11-HETE
（±）-Jasmonic Acid （250 mg）3-oxo-2R-（2Z）2-penten-1R-yl-cyclopentaneacetic acid； （±）-Jasmonic Acid
Thrombin （human） （100 U）Activated Factor II [IIa]
JNJ-10397049 （10 mg）N-（2,4-dibromophenyl）-N’-[（4S,5S）-2,2-dimethyl-4-phenyl-1,3-dioxan-5-yl]-urea
NMDA （250 mg）N-Methyl-D-Aspartic Acid； N-methyl-D-aspartic acid
25I-NBOH （hydrochloride） （5 mg）2；C-I-NBOH； 2-（（（4-iodo-2,5-dimethoxyphenethyl）amino）methyl）phenol, monohydrochloride
DNA  Tris HCl，1M，pH9.0    100mL
DNA  Triton    100mL