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人永生化表皮細(xì)胞；HaCaT圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人永生化表皮細(xì)胞；HaCaT圖片
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細(xì)胞源自一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚，角蛋白、角化細(xì)胞交聯(lián)外膜蛋白、中間絲相關(guān)蛋白陽性。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  15%FBS
傳代方法  1:10～1:20傳代，每周換液2～3次
傳代情況 C2
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：X；CSF1PO：9，11；D13S317：10，12；D16S539：9，12；D18S51：12；D19S433：13，14；D21S11：30.2；D2S1338：17，25；D3S1358：16；D5S818：12；D7S820：9，11；D8S1179：14；FGA：24；TH01：9.3；TPOX：11，12；vWA：16，17，OL；
同工酶 
染色體  72～88
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌 )    96 支
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯 )    96 支
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯長尖 )    96 支
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌長尖 )    96 支
10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝長尖 )    96 支
1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 袋裝 )    1000 支
1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 袋裝帶芯 )    1000 支
1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 盒裝 )    100 支
1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 盒裝已滅菌 )    100 支
1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯 )    100 支
10nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL    5μg
1400W(iNOS 抑制劑 )    2mg
15mL DNA 離心超濾管 (150-250 KD)    1個(gè)
15mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)    1個(gè)
15mL DNA 離心超濾管 (90-150 KD)    1個(gè)
15mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)    1個(gè)
1A75 枯草宿主菌菌種    1mL
1μL 超微量分光光度計(jì)    1個(gè)
2-( 環(huán)己胺基 ) 乙烷磺酸    5g
2-(N- 嗎啉 ) 乙磺酸    10g
2,3,5 氯化三苯基四氮唑    1g25-hydroxy Vitamin D2 （1 mg）4-methylene-3-[（2E）-2-[（1R，3aS，7aR）-octahydro-1-[（1R，2E，4S）-5-hydroxy-1，4，5-trimethyl-2-hexenyl]-7a-methyl-4H-inden-4-ylidene]ethylidene]-cyclohexanol； Ercalcidiol|25-Hydroxyergocalciferol； 25-hydroxy Vitamin D2
2-Pyridylamide oxime （500 mg）N-hydroxy-2-pyridinecarboximidamide； Picolinic Acid Amidoxime； 2-Pyridylamide oxime
1a，1b-dihomo Prostaglandin E1 （5 mg）9-oxo-11。alpha。，15S-dihydroxy-1a，1b-dihomo-prost-13E-en-1-oic acid； 1a，1b-dihomo PGE1； 1a，1b-dihomo Prostaglandin E1
13，14-dihydro-15-keto-tetranor Prostaglandin D2 （10 ug）9α-hydroxy-11，15-dioxo-2，3，4，5-tetranor-prostanoic acid； 13，14-dihydro-15-keto-tetranor Prostaglandin D2
Chaetocin （1 mg）2，2’，3S，3’S，5aR，5’aR，6，6’-octahydro-3，3’-bis（hydroxymethyl）-2，2’-dimethyl-[10bR，10’bR（11aS，11’aS）-bi-3，11a-epidithio-11aH-pyrazi’，2’:1，5]pyrrolo[2，3-b]indole]-1，1’，4，4’-tetrone； Chaetocin
PP2 （5 mg）3-（4-chlorophenyl）-1-（1，1-dimethylethyl）-1H-pyrazolo[3，4-d]pyrimidin-4-amine； AGL 1879； PP2
3-Methyladenine （25 mg）3-methyl-3H-purin-6-amine； NSC 66389|3-MA； 3-Methyladenine
CB-86 （50 mg）N-cyclopropyl-8-[3-（1，1-dimethylheptyl）-5-hydroxyphenoxy]-oct*； CB-86
Iso-Olomoucine （50 mg）2-[[7-methyl-6-[（phenylmethyl）amino]-7H-purin-2-yl]amino]-ethanol； Iso-Olomoucine
Programmed Cell Death Protein 4 （C-term） Blocking Peptide （200 ug）PDCD4； Programmed Cell Death Protein 4 （C-term） Blocking Peptide
Pseudolaric Acid B （10 mg）4a-（acetyloxy）-3-[（1E，3E）-4-carboxy-1，3-pentadien-1-yl]-3R，4S，4aS，5，6，9-hexahydro-3-methyl-1-oxo-7-methyl ester； 1H-4，9aR-ethanocyclohepta[c]pyran-7-carboxylic acid； PAB； Pseudolaric Acid B
ACS 67 （1 mg）7-[（1R，2R，3R，5S）-3，5-dihydroxy-2-[（3R）-3-hydroxy-5-phenylpentyl]cyclopentyl]-4-（3-thioxo-3H-1，2-dithiol-5-yl）phenyl ester， 5Z-heptenoic acid； ACS 67
13，14-dihydro-19（R）-hydroxy Prostaglandin E1 （50 ug）9-oxo-11。alpha。，15S，19R-trihydroxy-prostan-1-oic acid； 19（R）-hydroxy PGE0|13，14-dihydro-19（R）-hydroxy PGE1； 13，14-dihydro-19（R）-hydroxy Prostaglandin E1