詳細(xì)介紹
293來源病毒包裝細(xì)胞;ΦA圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 293來源病毒包裝細(xì)胞;ΦA圖片
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:2~1:3傳代。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:11,12;D13S317:11,12,13,14;D16S539:9,13;D18S51:17,18,19;D19S433:17,18;D21S11:27,28,30.2;D2S1338:19;D3S1358:15,16,17;D5S818:8,10;D7S820:11;D8S1179:12,15;FGA:23;TH01:7,9.3;TPOX:11;vWA:16,18,19,20;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類
293來源病毒包裝細(xì)胞;ΦA圖片細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
293來源病毒包裝細(xì)胞;ΦA圖片質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
293來源病毒包裝細(xì)胞;ΦA圖片操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
JWH 015 (5 mg)JWH 015, (2-methyl-1-propyl-1H-indol-3-yl)-1-naphthalenyl-methanone
19-R)-hydroxy Prostaglandin A2 (5 mg)19(R)-hydroxy PGA2, 19-R)-hydroxy Prostaglandin A2, 9-oxo-15S,19R-dihydroxy-prosta-5Z,1,13E-trien-1-oic acid
Metformin (5 g)Biguanide|Cidophage|DMGG|Glucofine, Metformin, N,N-dimethyl-imidodicarbonimidic diamide
13,14-dehydro-15-cyclohexyl Carbaprostacyclin (1 mg)13,14-dehydro-15-cyclohexyl Carbaprostacyclin, 6,9.alpha.-methylene-11.alpha.-hydroxy-15,16,17,18,19,2-hexanor-14-(1-hydroxycyclohexyl)-prost-5E-en-13-yn-1-oic acid
PtdIns-(4,5)-P2 (1,2-dipalmitoyl) (ammonium salt) (5 mg)Phosphatidylinositol-4,5-diphosphate C-16|DPPI-4,5-P2, PtdIns-(4,5)-P2, 1-(1,2R-dihexadecanoylphosphatidyl)inositol-4,5-bisphosphate, triammonium salt
(R)-(-)-Eicosapentaenyl-2 -Hydroxy-1 -Propylamide (10 mg)(R)-(-)-Eicosapentaenyl-2 -Hydroxy-1 -Propylamide, (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-N-((R)-2-hydroxypropyl)icosa-5,8,11,14,17-pentaenamide
酸銨(1KG)Ammonium Nitrate, CAS# 6484-52-2; ≥98%; HAZARDOUS MATERIAL
葉酸(5GM)Folic Acid, CAS# 59-30-3; MW 441.4; USP
肉蛋白胨(1KG)Meat Peptone, Peptic digest of animal tissue
無水磷酸氫二鈉(100GM)Sodium Phosphate, Dibasic, Anhydrous, ACS Grade; Cas# 7558-79-4; Formula: Na2HPO4; Formula Weight: 141.96羧肽酶 Y( 酵母 ) 1mg
牛血清白蛋白 5g
葡聚糖凝膠 G-50 中顆粒 25g
多聚半乳糖醛酸鈉鹽 1g
葡聚糖凝膠 G-10 25g
瓊脂糖凝膠 2B 100mL
超氧化物歧化酶 10Ku
組蛋白 25g
核酸組蛋白 ( 小牛胸腺 ) 250mg
透明質(zhì)酸鈉 1g
磷酸二酯酶Ⅱ 10U
中性蛋白酶 10mg
抑肽酶 2mg
牛肉蛋白胨 500g
蛋白胨 250g
酶水解酪素 100g
293來源病毒包裝細(xì)胞;ΦA圖片D- 半乳糖醛酸 1g
6- 磷酸葡萄糖鋇鹽 100mg
甲苯胺藍(lán) 5g
吡啰紅 G 5g
2,5- 二苯基惡唑 5g
傘形酮 5g
2,4- 二氯苯氧乙酸 5g