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檢測轉(zhuǎn)化細胞增殖Z準確可靠的方法
閱讀:246 發(fā)布時間:2018-3-21檢測DNA合成是目前檢測轉(zhuǎn)化細胞增殖zui準確可靠的方法,目前常用的方法有如下幾種:
(1)3H-胸腺嘧啶核苷滲入法(3H-TdR):胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA合成的前體物,處于S期的細胞不斷地攝取TdR用以合成DNA。3H-TdR摻入法是將被放射性標記的3H-TdR摻入DNA合成期的細胞,細胞內(nèi)3H-TdR摻入量的多少可客觀反映細胞復制DNA能力的大小,從而問接了解細胞增殖情況。通過檢測。H放射活性即可反映DNA含量。
1976年Mattem等首先采用此方法做體外藥敏試驗。此后經(jīng)過長期的廣泛研究,也己證實該法對各種動物腫瘤及人類腫瘤均有較好的預測價值和重復性,主要用于細胞增殖的檢測與藥物敏感性試驗等。但這種方法操作復雜,試劑含有同位素,具有放射性,對實驗者有一定的危害,故限制了它的應用。
(2)BrdU檢測法:BrdU中文全名為5-溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)摻入,而后利用抗BrdU的抗體耦聯(lián)不同的酶,加入不同發(fā)光特性的底物,然后再通過比色法、化學發(fā)光檢測或熒光信號檢測底物強度等步驟,反映BrdU的摻入量。該方法不需要再和放射性物質(zhì)打交道。
(3)EdU檢測法:BrdU雖然解決了接觸同位素的問題,但該方法需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合,但這就破壞了DNA雙鏈結(jié)構(gòu),對某些后續(xù)或同時進行的試驗,如其他染料的結(jié)合染色有影響?,F(xiàn)在有一種新的檢測方法能避免這種情況的發(fā)生——EdU檢測。EdU(5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷類似物,但其連有的炔羥基團在天然化合物中很少見,在轉(zhuǎn)化細胞增殖時能夠插入正在復制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應可以進行快速的細胞增殖檢測分析,可以有效地檢測處于S期的細胞百分數(shù)。與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比,更簡單,更快速,更準確。
鑒別 含量: 進口/國產(chǎn) 組氨酸 20mg/支 英文名稱 110890-200001 規(guī)格:
鑒別 含量: 進口/國產(chǎn) 黃山藥皂苷提取物 20mg/支 英文名稱 110891-200001 規(guī)格:
含量測定 含量: 進口/國產(chǎn) 積雪草苷 20mg/支 英文名稱 110892-200604 規(guī)格:
鑒別 含量: 進口/國產(chǎn) 羥基積雪草苷 20mg/支 英文名稱 110893-200201 規(guī)格:
含量測定 含量: 進口/國產(chǎn) 甜菜堿 20mg/支 英文名稱 110894-200503 規(guī)格:
含量測定 含量: 進口/國產(chǎn) 雪上一枝蒿甲素 20mg/支 英文名稱 110895-200303 規(guī)格:
鑒別 含量: 進口/國產(chǎn) 琥珀酸 20mg/支 英文名稱 110896-200001 規(guī)格:
含量測定 含量: 進口/國產(chǎn) α-蒎烯 20mg/支 英文名稱 110897-200001 規(guī)格:
含量測定 含量: 進口/國產(chǎn) γ-亞麻酸甲酯 20mg/支 英文名稱 110898-200503 規(guī)格:
轉(zhuǎn)化細胞