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羅斯肉瘤病毒PCR檢測試劑盒實驗原理
閱讀：66 發(fā)布時間：2021-3-26羅斯肉瘤病毒PCR檢測試劑盒說明書
本產品是即用型PCR試劑盒的改良產品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR 增強劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進行PCR 反應，具有廣泛的用途。
1. 方便，用戶只需準備模板和引物既可以進行PCR 實驗。
2. 快捷，操作步驟已經限度地簡化，能減少污染，降低實驗誤差。
3. 本產品A 型含電泳染料，PCR 反應液可直接上樣電泳，進一步簡化了操作。
4. 由于各成分的濃度和比例都經過精心優(yōu)化，反應的靈敏度高，特異性強。能擴增各種常見的DNA 樣品。
5. 產物可直接用于T 載體克隆，不需要額外的加A 反應。
使用及效果：將本產品15 μL 與用戶自備的模板，引物和水共15 μL 混合后，直接進行PCR反應（PCR 參數由用戶自己確定），反應結束后直接取10 μL 電泳檢查擴增結果。
羅斯肉瘤病毒PCR檢測試劑盒技術特點：
1、準確可靠，臨床雙盲對照試驗＞1000例，結果與金標準測序法比對，結果一致性大于99%。
2、高靈敏：可檢測低至10ng的人基因組DNA。
3、快速：整個檢測流程只需3小時。
4、簡便：試劑盒提供預混好的試劑，使體系配置操作簡便。
5、防污染
6、高特異性：雙重特異性組成，保證檢測結果的特異性和準確性引物與DNA互補鏈結合必需*配對，才能延伸。探針特異性與所檢測基因的PCR產物配對，在延伸中產生熒光。
組成及試劑配制:
1、 酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
羅斯肉瘤病毒PCR檢測試劑盒要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準確快速。
2. 引物經過優(yōu)化，特異性強。預期的 PCR 產物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結果。
準備物品：
清理液（A） 毫升
染色液（t B） 微升
稀釋液（C） 毫升
溶解液（tD） 毫升
產品說明書 1份
羅斯肉瘤病毒PCR檢測試劑盒操作方法：
1產品名稱直接測定
2測定準備
3背景對照測定
4樣品活性測定
5計算樣品活性
備注：
1．本產品為50次操作
2．操作時，須戴手套
3．操作時，避免污染母液
4．即刻進行熒光檢測分析
5．本產品染色劑不易洗掉，染色持久
6．本公司提供系列試劑產品
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。
運輸及保存：低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。