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          人B族鏈球菌抗體(Strep-B Ab) 酶聯(lián)免疫分析 試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

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          人B族鏈球菌抗體(Strep-B Ab) 酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說(shuō)明書
           本試劑盒僅供研究使用。 
           96T
          使用目的:
          本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 B 族鏈球菌抗體(Strep-B Ab) 表
          達(dá)。
          實(shí)驗(yàn)原理
          本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中人 B 族鏈球菌抗體(Strep-B Ab) 表達(dá)。用純化的
          抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中 B 族鏈球菌抗體(Strep-B Ab) 相結(jié)合,經(jīng)
          洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原
          復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸
          的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),與 CUTOFF
          值相比較,從而判定標(biāo)本中人 B 族鏈球菌抗體(Strep-B Ab) 的存在與否。
          試劑盒組成 
          1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
          2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 陽(yáng)性對(duì)照 0.5ml×1 瓶
          3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 陰性對(duì)照 0.5ml×1 瓶
          4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書 1 份
          5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張 
          6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
          標(biāo)本要求 
          1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
          馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
          2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
          人B族鏈球菌抗體(Strep-B Ab) 酶聯(lián)免疫分析 試劑盒操作步驟
          1. 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1
          孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
          2. 加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50µl。然后在待測(cè)樣品孔先
          加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測(cè)樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不
          觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
          3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 
          4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
          5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
          重復(fù) 5 次,拍干。
          6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。 
          7. 溫育:操作同 3。
          8. 洗滌:操作同 5。
          9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
          15 分鐘.
          10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
          11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止
          液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
          操作程序總結(jié):
          計(jì)算和結(jié)果判定:
           試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10 
           臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15 
           陰性判定:樣品 OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為 B 族鏈球菌抗體(Strep-B Ab) 陰

           陽(yáng)性判定:樣品 OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為 B 族鏈球菌抗體(Strep-B Ab) 陽(yáng)

          。 
          人B族鏈球菌抗體(Strep-B Ab) 酶聯(lián)免疫分析 試劑盒注意事項(xiàng)
          1.操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
          2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
          用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
          3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
          4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
          5.底物請(qǐng)避光保存。
          6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為 630nm 
          7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時(shí)必須
          注意安全。
          保存條件及有效期
          1.試劑盒保存:;2-8℃。
          2.有效期:6 個(gè)月

           

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