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ELISA測(cè)定試劑盒:抗體檢測(cè)基本原理
閱讀:623 發(fā)布時(shí)間:2019-8-19ELISA測(cè)定試劑盒:抗體檢測(cè)基本原理:
1、加入底物,酶作用底物,使之變色。底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物。
2、產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺有無(wú)定性或定量分析。
3、將特定抗體(一抗)結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫性。一抗是待測(cè)抗體的抗體,識(shí)別待測(cè)抗體。
4、測(cè)定時(shí),固定的一抗先與樣品稀釋液反應(yīng),將樣品中待測(cè)抗體固定;洗滌后再與二抗反應(yīng)。每一步之間都要進(jìn)行洗滌。
5、二抗是一種與酶偶聯(lián)的抗體,既保留了其免疫活性,又保留了酶的活性。二抗識(shí)別并結(jié)合待測(cè)抗體。
ELISA測(cè)定試劑盒操作事項(xiàng):
1、使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2、當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。
3、洗滌過(guò)程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。
4、在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí),請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,ELISA試劑盒不能混淆。
5、底物請(qǐng)避光保存。
6、控制好每一步的操作時(shí)間。
7、一次加樣時(shí)間較好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
8、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,較好做復(fù)孔。
9、如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定。