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          技術(shù)文章

          轉(zhuǎn)化細(xì)胞周期測(cè)定實(shí)驗(yàn)

          閱讀:305          發(fā)布時(shí)間:2018-6-21

          實(shí)驗(yàn)方法原理

          體外培養(yǎng)轉(zhuǎn)化細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂繁殖的能力,可用分裂指數(shù)來(lái)表示。它與生長(zhǎng)曲線(xiàn)有一定的,如隨著分裂指數(shù)的不斷提高,細(xì)胞也就進(jìn)入了指數(shù)生長(zhǎng)期。

          分裂指數(shù)指細(xì)胞 群體中分裂細(xì)胞 所占的百分比,它是測(cè)定細(xì)胞 周期的一個(gè)重要指標(biāo),也是不同實(shí)驗(yàn)研究選擇細(xì)胞的重要依據(jù)。

          實(shí)驗(yàn)材料

          細(xì)胞

          試劑、試劑盒

          胰酶甲醇培養(yǎng)液冰醋酸Giemsa染液

          儀器、耗材

          CO2培養(yǎng)箱普通顯微鏡培養(yǎng)皿蓋玻片吸管
          實(shí)驗(yàn)步驟

          一、消化細(xì)胞 ,將細(xì)胞 懸液接至內(nèi)含蓋玻片的培養(yǎng)皿中。

          二、CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí),使細(xì)胞長(zhǎng)在蓋片上。

          三、取出蓋片,按下列順序操作:

          PBS漂洗3分鐘→甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分鐘→Giemsa液染色10分鐘→自來(lái)水沖洗。

          四、蓋片晾干后反扣在載玻片上,鏡檢。

          五、計(jì)算

          分裂指數(shù)=分裂細(xì)胞 數(shù)/總細(xì)胞 數(shù)×100%

          收起 

          注意事項(xiàng)

          1.  操作時(shí)動(dòng)作要輕,以免使蓋片上的轉(zhuǎn)化細(xì)胞脫落。

           phospho-AMPK beta 1(Ser182) 巨噬細(xì)胞炎癥蛋白18抗體

           phospho-AMPK gamma 1 (Tyr307) 巨噬細(xì)胞炎性蛋白抗體

           phospho-AMPK gamma 1 (Tyr308) 巨噬細(xì)胞炎性蛋白20抗體

           phospho-ANAPC1 (Ser355) 巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β抗體

           phospho-ANAPC1(Ser377) 巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α抗體

           phospho-Androgen Receptor (Ser210) 巨噬細(xì)胞炎性蛋白19抗體

           phospho-Androgen Receptor (Ser213) 巨噬細(xì)胞炎性蛋白16抗體

           phospho-Androgen Receptor (Ser580) 巨噬細(xì)胞炎性蛋白15

           phospho-Androgen Receptor (Ser595) 巨噬細(xì)胞清道夫受體抗體

           phospho-Androgen Receptor (Ser650) 巨噬細(xì)胞克隆刺激因子抗體
          轉(zhuǎn)化細(xì)胞

           

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