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轉(zhuǎn)化細胞凍存液的配制方法
閱讀：1103 發(fā)布時間：2018-5-15 轉(zhuǎn)化細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段。在細胞建株和建系中，及時凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中，雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是*的實驗操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細胞系的時候，細胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等導(dǎo)致實驗失敗，如果沒有原始細胞的凍存，則因為上述的意外而前功盡棄。
1、常用凍存液組成成分
20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培養(yǎng)液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止細胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占總體積的10%，然后濾膜過濾后分裝保存?zhèn)溆谩?br />2、DMSO在凍存液中的作用
DMSO在4℃時對細胞無明顯毒性，分子量小、溶解度大、易透過細胞膜，降低細胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度，使細胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細胞內(nèi)水分也不會過分外滲，避免了細胞過分脫水皺縮；DMSO與水分子結(jié)合，可使冰點下降，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶損傷。
3、轉(zhuǎn)化細胞注意事項
1.DMSO 不用高壓滅菌；DMEM不能高溫高壓滅菌，可以過濾除菌。
2.DMSO要用新的，而且要避光保存。
3.DMSO：含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。
Pyridostigmine Bromide 200mg 溴吡斯的明標準品 101-26-8
200mg B-D-半乳糖苷酶標準品 9031/11/2
L-Cysteine Hydrochloride 200mg L-半胱氨酸鹽酸鹽標準品 7048/4/6
Pentoxifylline 200mg 己酮可可堿標準品 6493/5/6
Proparacaine Hydrochloride 200mg 鹽酸丙美卡因標準品 5875/6/9
Beclomethasone Dipropionate 200mg 丙酸倍氯米松標準品 5534/9/8
Mexiletine Hydrochloride 200mg 鹽酸美西律標準品 5370/1/4
Diltiazem Hydrochloride 200mg 鹽酸地爾硫卓標準品 1205003
Fluorometholone Acetate 200mg 氟米龍醋酸酯標準品 3801/6/7
轉(zhuǎn)化細胞