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細(xì)胞常見的轉(zhuǎn)染方法分析
閱讀：506 發(fā)布時(shí)間：2017-6-13ATCC細(xì)胞常見的轉(zhuǎn)染方法有：
1. 磷酸鈣法：該方法利用磷酸鈣DNA 復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞原理得到瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染結(jié)果，操作簡便但重復(fù)性差，不可用于原代細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。
2. DEAE-右旋糖苷法：帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞，可用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，方法相對簡便、結(jié)果可重復(fù)但對細(xì)胞有一定的毒副作用。
3. 電穿孔法：利用高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染均適用。適用性廣但細(xì)胞致死率高，DNA 和細(xì)胞用量大， 需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件。
4. 病毒介導(dǎo)法：通過侵染宿主ATCC細(xì)胞將外源基因整合到染色體中。適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞，體內(nèi)細(xì)胞等。
5. 陽離子脂質(zhì)體法：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞從而形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)染或瞬時(shí)性轉(zhuǎn)。該方法適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清。轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大。
6. 顯微注射法：用顯微操作將DNA 直接注入靶細(xì)胞核，適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細(xì)胞。
除上述傳統(tǒng)方法外，近年來上推出了一些陽離子聚合物基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，以其適用宿主范圍廣，操作簡便對細(xì)胞毒性小，轉(zhuǎn)染效率高受到研究者們的青睞。其中樹枝狀聚合物（Dendrimers）和聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的轉(zhuǎn)染性能*，但樹枝狀聚合物的結(jié)構(gòu)不易于進(jìn)一步改性，且其合成工藝復(fù)雜。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔二個(gè)碳個(gè)原子，即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH 下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(proton sponge)體。這種聚陽離子能將各種報(bào)告基因轉(zhuǎn)入各種種屬細(xì)胞，其效果好于脂質(zhì)聚酰胺，經(jīng)進(jìn)一步的改性后，其轉(zhuǎn)染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的ATCC細(xì)胞毒性低。大量實(shí)驗(yàn)證明，PEI 是非常有希望的基因治療載體。