RPMI1640培養(yǎng)基【詳情】
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規(guī)格:100ml

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RPMI1640培養(yǎng)基血清保存應該注意以下幾點：
(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂.
(2)熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用,平滑肌細胞收縮,肥大細胞和血小板釋放組胺,增強吞噬作用,促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學趨化和活化.
(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現(xiàn)沉淀.
(4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內一起過濾,切勿直接過濾血清.
(5)血清中的沉淀物絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理.顯微鏡下小黑點:經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象小黑點,常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清.
(6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質量.

細胞培養(yǎng)基種類與基本成分
細胞培養(yǎng)基的種類很多，按其來源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基（目前使用的培養(yǎng)基絕大部分是合成培養(yǎng)基），按其物質狀態(tài)分為干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類。干粉培養(yǎng)基需由實驗者自己配制并滅菌，液體培養(yǎng)基由專業(yè)商家提供，用戶可直接使用，非常方便。

碳水化合物
碳水化合物是細胞生長主要能量來源，其中有的是合成蛋白質和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉和醋酸等。
無機鹽
培養(yǎng)液中無機鹽的主要功能是幫助細胞維持滲透壓平衡。此外，通過提供鈉，鉀和鈣離子，幫助細胞調節(jié)細胞膜功能。培養(yǎng)液的滲透壓是一個非常重要的因素, 細胞通?？赡褪?/span>260mOsm/kg ～320 mOsm/kg。標準培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內波動。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質有可能會明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強酸或強堿中的物質。向培養(yǎng)液中添加HEPES 時需按以下方法調節(jié)鈉離子濃度。
緩沖系統(tǒng)
大多數(shù)細胞所需pH 在 7.2 - 7.4。但是，細胞培養(yǎng)zui適pH 值隨培養(yǎng)的細胞種類不同而不同。成纖維細胞喜歡較高pH (7.4 - 7.7), 而傳代轉化細胞系則需要偏酸pH (7.0 - 7.4)。
由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉（NaHCO3）與CO2 體系進行緩沖，因此，氣相中的CO2 濃度應與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2 濃度設定在5％，培養(yǎng)液中NaHCO3 的加入量為1.97g/L；如果CO2 濃度維持在10％，培養(yǎng)液中NaHCO3 的加入量為3.95g/L。
細胞培養(yǎng)瓶蓋不應擰得太緊，以保證氣體交換。HEPES 是一種非離子緩沖液，在pH 7.2 - 7.4 范圍內具有較好的緩沖能力，但是非常昂貴，在高濃度時對一些細胞可能有毒。HEPES 緩沖液可與低水平的碳酸鈉（0.34g/L）共用，以抵消因額外加入HEPES 引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下，細胞培養(yǎng)瓶的蓋子應擰緊，以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH 指示劑，酸性培養(yǎng)液呈橙黃色，堿性培養(yǎng)液呈深紅色。
維生素
在細胞培養(yǎng)中，盡管血清是維生素重要來源，但是許多培養(yǎng)基中添加了各種維生素以適合更多的細胞系生長。

液體培養(yǎng)基應于4℃冰箱避光保存，實驗前放入37℃預熱。未加血清液體培養(yǎng)基有效期為12 個月。液體培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺會隨著儲存時間的延長而慢慢分解。如果細胞生長不良，可以再添加適量L-谷氨酰胺。