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        1. 上海仁捷生物科技有限公司

          植物蔗糖合成酶(SS)ELISA試劑盒案例說明

          時間:2017-9-6閱讀:1205

          植物蔗糖合成酶(SS)ELISA試劑盒(活性檢測)

          英文名稱:Plant SS ELISA Kit
          實(shí)驗(yàn)類型:夾心法
          檢測范圍:5 IU/ml  160 IU/ml。
          zui低檢測限:1.0 IU/ml。
          應(yīng)用范圍:血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體(本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室科研及非臨床用途)

          實(shí)驗(yàn)原理

          試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被植物蔗糖合成酶(SS)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物蔗糖合成酶(SS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

          植物蔗糖合成酶(SS)ELISA試劑盒組成

          試劑盒組成96孔配置48孔配置備注
          微孔酶標(biāo)板8孔×12條8孔×6條 無
          標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL×6管0.3mL×6管
          樣本稀釋液6mL3mL
          檢測抗體-HRP10mL5mL
          20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋
          底物A6mL3mL
          底物B6mL3mL
          終止液6mL3mL
          封板膜2張2張
          說明書1份1份
          自封袋1個1個
           

          1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:160、80、40、20、10、5 IU/ml

          2.  經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

          注意事項(xiàng)

          1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

          2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

          3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

          4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

          5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

          6. 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。

          7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

          8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

          9. 不能使用過期產(chǎn)品。

          10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

           

           

           

          洗板方法

          手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。

          自動洗板:如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。

           

           

           

          實(shí)驗(yàn)結(jié)果計算

          以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

          Elisa試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

          (此圖僅供參考)

           

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