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        1. 上海仁捷生物科技有限公司

          人GCLC ELISA試劑盒檢測原理及檢測范圍

          時(shí)間:2017/5/5閱讀:1666

          實(shí)驗(yàn)原理

          試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包人谷氨酰半胱氨酸連接酶催化亞基GCLC)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人谷氨酰半胱氨酸連接酶催化亞基GCLC)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
          樣本處理及要求需要而未提供的試劑和器材

          • 酶標(biāo)儀(450nm)
          • 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
          • 37℃恒溫箱
          • 蒸餾水或去離子水

           

          試劑盒組成

          名稱

          96孔配置

          48孔配置

          備注

          微孔酶標(biāo)板

          8孔×12

          8孔×6

          標(biāo)準(zhǔn)品

          0.3mL*6管

          0.3mL*6管

          樣本稀釋液

          6mL

          3mL

          檢測抗體-HRP

          10mL

          5mL

          20×洗滌緩沖液

          25mL

          15mL

          按說明書進(jìn)行稀釋

          底物A

          6mL

          3mL

          底物B

          6mL

          3mL

          終止液

          6mL

          3mL

          封板膜

          2張

          2張

          說明書

          1份

          1份

          自封袋

          1個(gè)

          1個(gè)

          1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:240、120、60、30、15、0 U/L

          2.  經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

           

          注意事項(xiàng)

          • 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
          • 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
          • 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
          • 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
          • 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
          • 在儲存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
          • 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
          • 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
          • 不能使用過期產(chǎn)品。
          • 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

           

          試劑準(zhǔn)備

          試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

          20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

           

          操作步驟

          1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
          2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
          3.   樣本孔待測樣本50μL;空白孔不加。
          4.   除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
          5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
          6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
          7.   每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

           

          實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

          所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品濃度。

           

          試劑盒性能

          •  檢測范圍7.5 U/L  240 U/L。
          •  靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 U/L
          •  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
          •  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 
          • 人GCLC ELISA試劑盒檢測原理及檢測范圍
          • 人GCLC ELISA試劑盒檢測原理及檢測范圍
          • 人GCLC ELISA試劑盒檢測原理及檢測范圍
          • 詳細(xì)的產(chǎn)品電子說明書請。。。

           

           

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