詳細(xì)介紹
做ELISA的經(jīng)驗(yàn)總結(jié): 1、包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別,所以保存抗原很重要,做重組蛋白時(shí),一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。 3、加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。 4、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。 5、終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。在批放行前,每一批酶聯(lián)免疫試劑都完成37℃熱穩(wěn)定性試驗(yàn),試驗(yàn)結(jié)果符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控。