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技術(shù)文章

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測(cè)試劑盒使用方法

閱讀：2085 發(fā)布時(shí)間：2017-12-4

上海依赫生物科技有限公司專業(yè)生產(chǎn)ELISA試劑盒

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測(cè)試劑盒

用途：用于小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中去甲腎上腺素（NE）的測(cè)定。

檢測(cè)原理

本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定樣品中小鼠去甲腎上腺素（NE）的水平。向預(yù)先包被了小鼠去甲腎上腺素（NE）單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入去甲腎上腺素（NE），溫育；溫育后，加入生物素標(biāo)記的去甲腎上腺素（NE）抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中小鼠去甲腎上腺素（NE）的濃度呈正相關(guān)。

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測(cè)試劑盒廠家

上海依赫生物科技有限公司專業(yè)生產(chǎn)ELISA試劑盒

試劑盒組成

	名稱	96孔配置 12孔×8條	48孔配置 12孔×4條	備注
1	標(biāo)準(zhǔn)品（500pg/ml)	0.5ml	0.5ml	稀釋即用型
2	酶標(biāo)包被板	1塊	1塊	已包被即用型
3	標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液	3ml	3ml	即用型
4	鏈霉親和素-HRP	6ml	3ml	即用型
5	30x倍濃縮洗滌液	20ml	20ml	蒸餾水稀釋
6	生物素標(biāo)記的抗去甲腎上腺素（NE）抗體	2ml	2ml	即用型
7	顯色劑A液	6ml	3ml	即用型
8	顯色劑B液	6ml	3ml	即用型
9	終止液	6ml	3ml	即用型
10	說(shuō)明書	1份	1份	即用型
11	封板膜	2張	2張	不可反復(fù)使用
12	密封袋	1個(gè)	1個(gè)	即用型

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測(cè)試劑盒批發(fā)廠家

需要而未提供的試劑和器材

酶標(biāo)儀(450nm檢測(cè)波長(zhǎng)濾光片，570nm或630nm校正波長(zhǎng)濾光片) 。
洗板機(jī)（可調(diào)注液量，保證每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。
超凈工作臺(tái)，生物安全柜，通風(fēng)柜。
高精度單道加液器（量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
高精度多道加液器（8道或12道，量程為50-300μl).
37℃恒溫箱。
低溫離心機(jī)。
電冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9. 漩渦混合儀，低頻振蕩器等

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商

注意事項(xiàng)

從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

6. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸，使用時(shí)必須注意安全。

7. 各步驟加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校準(zhǔn)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

8. 每次試驗(yàn)測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔zui高濃度的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n）。

9. 配制試劑時(shí)，要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑，充分混勻?qū)y(cè)試結(jié)果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無(wú)微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板1分鐘，例如做圓周動(dòng)作，使加入孔中的反應(yīng)液混勻。

10. 實(shí)驗(yàn)用酶標(biāo)儀應(yīng)嚴(yán)格按使用說(shuō)明書規(guī)范操作，并在使用前充分預(yù)熱。

11. 手工洗板應(yīng)注意：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。

上海依赫生物科技有限公司專業(yè)生產(chǎn)ELISA試劑盒

樣本要求

1．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存或根據(jù)存放，時(shí)間做相應(yīng)溫度調(diào)整，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，（由于樣本種類過(guò)多，每個(gè)單位處理方式不一樣，本說(shuō)明書不做詳細(xì)介紹）。

操作程序

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：（本試劑系統(tǒng)提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶請(qǐng)按照說(shuō)明自行在小試管中倍比稀釋）按下表格執(zhí)行：

250pg/ml	（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）	120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
125pg/ml	（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）	120μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
62.5pg/ml	（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）	120μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
31.2pg/ml	（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）	120μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15.6pg/ml	（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）	120μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加樣：1）空白孔：（空白對(duì)照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗去甲腎上腺素（NE） 抗體，鏈霉親和素-HRP，其余各步操作相同 ；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔:加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl，鏈霉親和素-HRP50μl（標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素標(biāo)記抗體，故在操作時(shí)不加，只加鏈霉素-HRP）；3）樣本反應(yīng)孔：加入樣本40μl，然后各加入抗去甲腎上腺素（NE） 抗體10μl、鏈霉親和素-HRP（空白孔除外）50μl。蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)廠家

結(jié)果判斷

1. 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。（若不減零孔值，標(biāo)準(zhǔn)曲線的零孔應(yīng)相交于Y軸）

2. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。

3．手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn)。通過(guò)標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析計(jì)算結(jié)果。

4．若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

操作總結(jié)

準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品