產(chǎn)品名稱：illumina代理 病毒基因測序試劑

產(chǎn)品貨號：MS-102-3001

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產(chǎn)品名稱：MiSeq Reagent Kit v3 (150 cycles)基因測序試劑盒

產(chǎn)品貨號：MS-102-3001

產(chǎn)品規(guī)格：

大輸出: 15 Gb（600個循環(huán)數(shù)），3.8 Gb（150個循環(huán)數(shù)）

大Read: 多達2500萬

核酸類型: RNA, DNA

試劑類型: 雙端測序, 簇生成, 邊合成邊測序

技術(shù): 測序

系統(tǒng)兼容性:研究模式下的MiSeqDx, 研究模式下的MiSeq FGx, MiSeq, MiSeq

產(chǎn)品介紹：

MiSeq試劑盒v2實現(xiàn)更高通量，減少MiSeq運行次數(shù)。MiSeq試劑盒v2保留了與v1試劑盒相同的即用型預(yù)裝試劑盒，但改良了化學(xué)過程，提高簇密度，減少循環(huán)時間，并提高質(zhì)量（Q）分值。目前還提供Micro和Nano規(guī)格的MiSeq試劑盒v2，適合低通量的應(yīng)用。MiSeq試劑盒v3的通量在所有MiSeq試劑盒中居*。這款v3試劑盒保留了與v1和v2試劑盒相同的即用型預(yù)裝試劑盒，通過改良試劑，可提高簇密度和片段長度，并提高質(zhì)量(Q)分值。

借助MiSeq試劑盒v3，研究人員可：

• 使單次運行的輸出翻倍

• 使用600次循環(huán)試劑盒，使片段長度長延伸至2 x 300堿基對

• 將片段數(shù)量增至2500萬個，以開創(chuàng)新的應(yīng)用

更新系統(tǒng)軟件后，可釋放v3試劑盒的全部功能。

MiSeq v3試劑盒可使每個流動槽的輸出量翻倍。該試劑盒以600次循環(huán)格式提供，在任何Illumina測序系統(tǒng)上均可生成長片段長度。該試劑盒還提供150次循環(huán)格式，該格式支持計數(shù)應(yīng)用。此外，我們將繼續(xù)供應(yīng)所有MiSeq試劑盒v2配置。MiSeq試劑組件采用RFID編碼，并可巧妙地與MiSeq系統(tǒng)交互，以驗證與用戶定義的應(yīng)用之間的兼容性。

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illumina中國授權(quán)代理商：華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司

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Illumina二代測序技術(shù)，邊合成邊測序（SBS），是廣泛采用的新一代測序（NGS）技術(shù)，負(fù)責(zé)產(chǎn)生世界上90％以上的測序數(shù)據(jù)。

Illumina的二代測序技術(shù)稱為邊合成邊測序(Sequencing-by-Synthesis,簡稱SBS)。SBS主要包括堿基延伸、熒光激發(fā)及信號收集、剪切等3個步驟。這3個步驟可以重復(fù)，循環(huán)進行。每循環(huán)一次測定一個堿基。想測定多少個堿基（即讀長），就循環(huán)多少次。測序循環(huán)次數(shù)可以在軟件里設(shè)定。到底測序多長合適，要根據(jù)項目性質(zhì)和需求來決定。大多數(shù)情況下，SR實驗（單端測序）測定1x50個堿基，PE實驗（雙端測序）測定2x150個堿基。

1 堿基延伸

Illumina測序試劑里所使用的dNTP級具特色，它們同時具有兩個修飾基團：一個熒光基團，一個可逆終止基團。A、G、C、T 4種堿基分別標(biāo)記4種不同的熒光基團，它們在不同波長的激光激發(fā)下，能夠發(fā)射不同波長（即顏色）的熒光。熒光顏色與堿基種類一一對應(yīng)，因此根據(jù)激發(fā)光的波長可以識別堿基。4種堿基的終止基團是一樣的。由于終止基團的存在，所有dNTP每次都只能延伸1個堿基，無論給予多長的反應(yīng)時間。又由于該終止基團是可逆的，在熒光信號收集完畢之后，可以用剪切劑切除該終止基團，使堿基恢復(fù)自然的可延伸狀態(tài)，這時即可繼續(xù)進行下一輪循環(huán)，再測定一個堿基。

可逆終止基團技術(shù)是Illumina二代測序的一大特色。它與橋式PCR技術(shù)一起，構(gòu)成了Illumina二代測序的兩大支柱，為穩(wěn)定獲得高質(zhì)量的測序數(shù)據(jù)打下了堅實的基礎(chǔ)。

2 信號采集

HiSeq系列測序儀具有紅綠兩根激光管，兩個濾色片。它們兩兩組合，可以形成4種不同的激發(fā)波長，正好分別用于激發(fā)A、G、C、T 4種堿基。

Cluster上所標(biāo)記的熒光基團在激光激發(fā)下產(chǎn)生的信號，可以用相機拍攝或者掃描的方式收集信號。掃描技術(shù)速度比較快，被X10系列采用。由于FC面積比較大，而且上表面和下表面要分別拍照，所以拍照過程相當(dāng)耗時。對于經(jīng)典的HiSeq 2000來說，一次測序循環(huán)所產(chǎn)生的熒光信號，需要大約40分鐘的時間才能拍照收集完畢，時間比測序反應(yīng)本身還要長。

3 剪切

熒光信號收集完畢后，關(guān)閉激光，用剪切劑去除測序引物的延伸產(chǎn)物上的堿基所標(biāo)記的熒光基團和終止基團。兩個修飾基團均被切除，一方面消去干擾熒光，一方面使鏈末端的堿基回復(fù)到自然的可延伸狀態(tài)，為下一輪測序做好準(zhǔn)備。

再重復(fù)合成、激發(fā)、收集等步驟，即可進行第二個堿基的測序。

測序循環(huán)可以重復(fù)多次。理論上可以一直重復(fù)，直到信噪比降低得無法有效識別堿基信號為止。由于熒光基團的發(fā)光效率持續(xù)不斷在衰減，Taq酶的活性也在持續(xù)不斷地衰減，所以實際上測序循環(huán)次數(shù)是有限的，大重復(fù)次數(shù)與sbs試劑的配方有關(guān)。測序的循環(huán)次數(shù)可以在軟件設(shè)置過程中人為，這個重復(fù)次數(shù)就是每個測序片段的讀長。目前，Illumina平臺的讀長有2x100 bp，2x125 bp，2x150 bp，2x300 bp等多種，其中2x150 bp用得zui廣泛。

單端測序：單端測序(Single-read)首先將DNA樣本進行片段化處理形成200-500bp的片段，引物序列連接到DNA片段的一端，然后末端加上接頭，將片段固定在flow cell上生成DNA簇，上機測序單端讀取序列。

雙端測序：雙端測序(Paired-end)方法是指在構(gòu)建待測DNA文庫時在兩端的接頭上都加上測序引物結(jié)合位點，在一輪測序完成后，去除一輪測序的模板鏈，用對讀測序模塊(Paired-End Module)引導(dǎo)互補鏈在原位置再生和擴增，以達到第二輪測序所用的模板量，進行第二輪互補鏈的合成測序。

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