3.3 氣相色譜-質(zhì)譜法
3.3.1 樣品提取
稱取100-110mg植物油于帶有螺旋蓋的玻璃管中，加入50μL內(nèi)標工作液和2mL無水四qing呋喃，渦旋15s使之混勻。加入30μL溴化鈉的酸性水溶液，渦旋后在50oC搖床震蕩反應15min。加入3mL 0.6%的碳酸氫鈉溶液以終止反應。為了將油脂從水相中分離出來，往樣品中加入2mL正庚烷，旋渦15s。兩相分離后，將上層液相轉(zhuǎn)移至干凈的玻璃管中，氮吹至干（35-40oC下，15-20min），并用1mL無水四qing呋喃復溶。
然后，加入1.8mL硫酸/甲醇溶液，渦旋10s，然后將其置于40oC搖床震蕩反應16h。反應結(jié)束后，向樣品溶液中加入0.5mL飽和碳酸氫鈉溶液，渦旋10s，以終止反應。氮吹至約1mL，以去除有機溶劑，待凈化。
待凈化液中依次加入2mL硫酸鈉溶液和2mL正庚烷，渦旋10s充分混合。靜置，待兩相自然分層后棄去上層液相（含有脂肪酸甲酯的正庚烷），并用正庚烷重復提取1次，殘留液待衍生化反應。
向殘留液中加入250μL飽和苯基硼酸溶液，渦旋10s，室溫下超聲處理5min。加入1mL正庚烷，渦旋10s，轉(zhuǎn)移上層液相至空瓶；用1mL正庚烷再提取次，混合兩次提取液。氮吹至全干。加入1mL正庚烷復溶，渦旋10s至充分溶解，濾膜過濾后轉(zhuǎn)移至進樣瓶待測。
3.3.2 樣品測定
氣相色譜條件
色譜柱：聚二甲基硅氧烷毛細管色譜柱(30m×0.25mm×1.0μm )或相當型號色譜柱。進樣量：1.0μL。進樣方式：脈沖不分流進樣。進樣口溫度：250oC。載氣：高純氦氣（純度≥99.999%）。流速：0.8mL/min。升溫程序：80oC保持1min；以10oC/min 的速率升溫至170oC，再以3oC/min 的速率升溫至200oC；然后以15oC/min 的速率升溫至300oC，保持15min。
質(zhì)譜條件
傳輸線溫度：300oC。離子源溫度：230oC。四桿溫度：150oC。離子源：電子轟擊模式（EI）。選擇離子監(jiān)測模式（SIM）參數(shù)：（1）3-MBPD的苯基硼酸衍生物（m/z）147（定量離子）；240（定性離子）；（2）3-MBPD-d5的苯基硼酸衍生物（m/z）150（定量離子）；245（定性離子）。溶劑延遲時間：5min。
3.3.3 方法學驗證
3.3.3.1 標準曲線及相關(guān)系數(shù)
配制縮水甘油棕櫚酸酯（Gly-P）與內(nèi)標氘代縮水甘油棕櫚酸酯（Gly-P-d5）不同濃度比例的標準溶液（如表4所示），以Gly-P（以Gly計）與內(nèi)標Gly-P-d5（以Gly-d5計）的質(zhì)量比為橫坐標、以3-MBPD定量離子（m/z 147）與3-MBPD-d5定量離子（m/z 150）的峰面積之比為縱坐標，做標準曲線得到標準曲線方程y=0.7355x+0.0369，計算得相關(guān)系數(shù)R2=0.9971。
表4 Gly-P與內(nèi)標Gly-P-d5濃度的比例
Gly-P
|
Gly-P-d5
| ||
濃度（μg/mL）
|
添加量（μL）
|
濃度（μg/mL）
|
添加量（μL）
|
10
|
25
|
50
|
50
|
10
|
50
|
50
|
50
|
10
|
100
|
50
|
50
|
100
|
20
|
50
|
50
|
100
|
40
|
50
|
50
|
100
|
80
|
50
|
50
|
3.3.3.2 方法回收率及精密度實驗
以不含縮水甘油脂肪酸酯的植物油（特初榨橄欖油）為空白樣品基質(zhì)，分別添加低、中、高3個濃度水平的Gly-P標準品，每個水平重復3次實驗，按照前述方法處理和分析樣品，計算回收率（如表5所示），平均回收率在83.45%～94.12%，RSD為3.67%~9.04%，回收率和精密度都能滿足分析要求。
表5 加標回收率和精密度實驗結(jié)果（n=3）
加標量（mg/kg）
|
測得平均值（mg/kg）
|
平均回收率（%）
|
RSD（%）
|
0.5
|
0.47
|
94.12
|
9.04
|
2
|
1.77
|
88.72
|
6.22
|
6
|
5.01
|
83.45
|
3.67
|
（三）采用標準和*標準的情況，以及與、國外同類標準水平的對比，或者與測試的國外樣品、樣機的有關(guān)數(shù)據(jù)對比情況
本標準等同采用了美國油脂化學家學會（AOCS）的推薦標準Joint AOCS/JOCS Official Method Cd 28-10《Glycidyl fatty acid esters in edible oils》和AOCS Official Method 29a-13《2- and 3-MCPD fatty acid esters and glycidol fatty acid esters in edible oils and fats by acid transesterification》中食用油脂的縮水甘油脂肪酸酯測定方法的內(nèi)容。本標準發(fā)布實施后，將達到*水平。
（四）與有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強制性標準、行業(yè)標準的關(guān)系
本標準頒布實施后，填補我國植物油脂中縮水甘油脂肪酸酯測定方法的空白，更有利于行業(yè)應用；與現(xiàn)行的法律、法規(guī)及其他標準沒有矛盾。
（五）重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù)
無。
（六）按照標準化法的有關(guān)規(guī)定，提出強制性標準或推薦性標準的建議
建議將本標準作為糧食行業(yè)推薦標準使用。
（七）廢止現(xiàn)行有關(guān)標準的建議
無。
（八）其他應予說明的事項
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