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詳細介紹
Cellulose DE-52 DEAE 纖維素 DE-52
產品信息：
纖維素DE-52為中等堿性陰離子交換劑，柱層析用于吸附劑，用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等各種生物高分子。
纖維素DE-52提取法純化多克隆抗體
該法提取IgG簡便，既可小量提取，也可大量制備。
1．批量提取法 稱取DEAE-纖維素(DE52)50g，置于1000ml燒杯中，先以蒸餾水漂浮除去細顆粒，再經酸堿處理后，用0.01～0.05mol/L，pH8.0左右的磷酸鹽緩沖液(PB)平衡。將水分抽干，或用布氏濾斗(內放兩層濾紙)過濾，收集濕纖維素，以降低其離子強度。按1ml血清加濕重5g DE52，經過充分攪拌，置4℃吸附1h。上清液可再如此處理一次，即獲得較純的IgG。該法提取IgG簡便，既可小量提取，也可大量制備。
2．Tris-Cl離子交換層析法(Ion-exchange chromatography)
【材料和試劑】
（1）DE52纖維素。
（2）HCl；NaOH；0.01～0.05mol/L，pH8.0 PB；0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl；0.5mol/L NaCl。
（3）待純化標本：雜交瘤腹水或培養(yǎng)上清，免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。
（4）1.5×50cm 層析柱；透析袋；紫外分光光度計及其他透析和層析所需的試劑和器材。
【操作步驟】 Cellulose DE-52 DEAE 纖維素 DE-52
（1）DE52纖維素的處理：DE52經酸、堿處理，0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡。
（2）裝柱：將層析柱固定于滴定架上，柱底墊一圓形尼龍紗，出口接一細塑料管并關閉出水。將浸泡于0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中，待DE52自然沉降3～5cm高時，吸除0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl，或松開出水口螺旋夾，控制流速1～2ml/min，同時連續(xù)加入DE52至所需高度。待DE52*沉降后，柱面放一圓形濾紙片。
（3）平衡：松開出水口螺旋夾，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡，控制流速為15滴/min，待流出液與洗脫液之pH值達到*時，停止平衡。
（4）待提取樣品的準備：將蛋白裝入透析袋里，置4℃冰箱，對0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析。
（5）加樣、洗脫與收集：用吸管吸去柱面液體，以毛細吸管沿柱壁加入樣品，樣品體積相當于柱床體積的1%～2%，蛋白濃度為50～70mg。啟開出水口螺旋夾使樣品緩慢進入柱床內，并用少量洗脫液清洗柱壁；待液體進入柱床后，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl洗脫，控制流速為14～16滴/min。分部收集器收集，紫外監(jiān)測，或人工收集，以紫外分光光度計分別測定每管280nm OD值，描繪洗脫液峰。
（6）濃縮：將洗脫液的280nm OD上峰段與下峰段各管分別合并，裝入透析袋，以PEG濃縮至所需體積。
Tris-PO4離子交換層析法
該法在上述方法的基礎上稍加改良，即通過梯度洗脫，可用于血清中IgG和IgM的提取。
【材料和試劑】
（1）DE52纖維素。
（2）待純化標本：雜交瘤腹水或培養(yǎng)上清，免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。
（3）1.5×50cm 層析柱；透析袋及其他透析和層析所需的試劑和器材。
（4）梯度洗脫液包括：0.005 mol/L，pH8.6 Tris-PO4；0.055mol/L，pH6.0 Tris-PO4；.5mol/L，pH5.1 Tris-PO4。
【操作步驟】
（1）蛋白標本對0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4透析。
（2）DE52裝柱，并以0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4平衡。
（3）加樣，以0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4洗脫，紫外監(jiān)測直至洗脫液280nm OD回到基線。這一步驟可除去血清中其他蛋白。
（4）以350ml 0.055mol/L，pH6.0 Tris-PO4洗脫，這一步驟可用于純化血清IgG和IgM。
（5）以125ml 0.055mol/L，pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L，pH5.1 Tris-PO4梯度洗脫，總量收集250ml；重復步驟（5）。
（6）根據280nm峰值合并蛋白峰，透析濃縮和保存同上。
用過的DE52可用0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl梯度洗脫回收。再用蒸餾水洗至中性，加入0.02%疊氮鈉于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
性質用途
性狀：干燥細結晶或纖維狀
基質 高度交聯纖維素
配基 二乙基氨基乙基
配基密度 40μmol /ml
吸附載量 180mg HSA/ml
填料的顆粒大小 50μm
zui大流速 300cm/h
pH范圍 3-10，在位清洗時pH范圍可到2-11
化學穩(wěn)定性 各種緩沖液及鹽，0.5M NaOH及醋酸，8M脲，6M鹽酸胍，乙醇，異丙醇等
物理穩(wěn)定性 0.1M中性緩沖液中，120℃30min
層析柱裝填
- 吸附性層析一般建議裝填高度為 10~15cm 高，分子篩建議裝填高度為60~90cm
1）組裝柱（如有需要連接裝柱器）。
2）取下下柱頭用裝柱緩沖液沖洗柱底適配器，排除篩網下面的氣泡，將下柱頭安裝
在層析柱底部，旋緊調整旋鈕，并在層析柱底部保留 1cm 左右高度的液體。
3）用裝柱緩沖液重懸介質，制成 50%~75%左右的介質懸浮液。
4）一次性將介質倒入柱管中，避免產生氣泡。
5）如連接有裝柱器，立即往裝柱器中緩慢加入裝柱緩沖液。將適配器或裝柱器上蓋
與層析系統(tǒng)相連接。
6）設定所需流速+，打開柱下端，啟動泵，進行壓柱。
7）柱床穩(wěn)定后保持 30min 以上，關閉泵和底閥
8）如連接有裝柱器，移除裝柱器后連接適配器。
9）調節(jié)適配器，使其固定在膠面上 0.5~1cm 處，并保證適配器入口充滿液體。
10）打開底閥，連接泵，繼續(xù)用設定的流速（注意壓力不要超過 0.3Mpa）繼續(xù)壓柱
待膠面高度保持不變，標記此時膠面高度
11）暫停機器，關閉底閥，斷開柱頭入口，調低適配器至膠面下 3~5mm 處。封閉
上柱口，裝柱完成。
| 蛋白層析柱/蛋白純化柱（一端柱床可調，螺紋型） | |||||
| 內徑（mm） | 耐壓（bar） | 床層高度（mm） | 床層體積（mL） | 床層高度（mm） | 貨號（玻璃） |
| 10 | 5 | 100 | 0-7 | 0-100 | LK10100 |
| 10 | 200 | 4月15日 | 55-200 | LK10200 | |
| 10 | 400 | 20-31 | 255-400 | LK10400 | |
| 10 | 600 | 35-47 | 455-600 | LK10600 | |
| 10 | 800 | 51-62 | 655-800 | LK10800 | |
| 10 | 1000 | 67-78 | 855-1000 | LK101000 | |
| 15 | 5 | 100 | 0-17 | 0-100 | LK15100 |
| 15 | 200 | 9.7-35.3 | 55-200 | LK15200 | |
| 15 | 400 | 45-70 | 255-400 | LK15400 | |
| 15 | 600 | 80-106 | 455-600 | LK15600 | |
| 15 | 800 | 116-141 | 655-800 | LK15800 | |
| 15 | 1000 | 151-176 | 855-1000 | LK151000 | |
| 20 | 5 | 100 | 0-31 | 0-100 | LK20100 |
| 20 | 200 | 17-63 | 55-200 | LK20200 | |
| 20 | 400 | 80-126 | 255-400 | LK20400 | |
| 20 | 600 | 143-188 | 455-600 | LK20600 | |
| 20 | 800 | 205-251 | 655-800 | LK20800 | |
| 20 | 1000 | 268-314 | 855-1000 | LK201000 | |
| 25 | 5 | 100 | 0-49 | 0-100 | LK25100 |
| 25 | 200 | 27-98 | 55-200 | LK25200 | |
| 25 | 400 | 125-196 | 255-400 | LK25400 | |
| 25 | 600 | 223-294 | 455-600 | LK25600 | |
| 25 | 800 | 321-392 | 655-800 | LK25800 | |
| 25 | 1000 | 419-490 | 855-1000 | LK251000 | |
| 37 | 5 | 100 | 0-107 | 0-100 | LK37100 |
| 37 | 200 | 59-214 | 55-200 | LK37200 | |
| 37 | 400 | 274-430 | 255-400 | LK37400 | |
| 37 | 600 | 488-644 | 455-600 | LK37600 | |
| 37 | 800 | 703-859 | 655-800 | LK37800 | |
| 37 | 1000 | 918-1074 | 855-1000 | LK371000 | |
| 50 | 5 | 100 | 0-196 | 0-100 | LK50100 |
| 50 | 200 | 108-392 | 55-200 | LK50200 | |
| 50 | 400 | 500-785 | 255-400 | LK50400 | |
| 50 | 600 | 893-1177 | 455-600 | LK50600 | |
| 50 | 800 | 1285-1570 | 655-800 | LK50800 | |
| 50 | 1000 | 1678-1962 | 855-1000 | LK501000 | |
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