 |
上海申知心生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
會(huì)員.png)
10
聯(lián)系電話
|
上海申知心生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
聯(lián)系電話
2018-8-10 閱讀(2675)
溶血性貧血是由于紅細(xì)胞破壞增多、增速，超過造血代償能力時(shí)所發(fā)生的一組貧血。紅細(xì)胞的平均壽命為15～20d，紅細(xì)胞破壞速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過骨髓的代償潛力時(shí)，則出現(xiàn)貧血。溶血性貧血發(fā)病的基本問題是紅細(xì)胞壽命縮短，易于破壞。主要通過以下三方面的機(jī)制：紅細(xì)胞膜的異常變化；血紅蛋白的異常；機(jī)械性因素。
1 乙酰苯肼誘發(fā)的溶血性貧血大鼠模型
(1)復(fù)制方法 體重為180～250g的雄性大鼠，大鼠常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和進(jìn)食。分別于造模的1, 4, 7日經(jīng)腹腔注射2％乙酰苯肼(Acetylphenylhydrazine, APH)生理鹽水溶液，初次注射劑量為1ml/100g體重，第2、3次劑量減半為0.5ml/100g體重。注射乙酰苯肼后，每天上午經(jīng)大鼠尾靜脈取血作血紅蛋白測(cè)定，并進(jìn)行血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞計(jì)數(shù)。通過不同方法分別作網(wǎng)織紅細(xì)胞、海氏小體(Heina body)、中性粒細(xì)胞、堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、 ATP酶、琥珀酸脫氫酶(SKH)及葡萄糖-6-磷酸酶(G-6- P)染色。
(2)模型特點(diǎn) 注射APH后第3日，模型大鼠開始出現(xiàn)疲乏無力，行動(dòng)遲緩，嗜睡、喘息；面、眼、耳、尾蒼白，體溫偏低等臨床表現(xiàn)。肉眼觀察可見肝、脾均腫大，脾腫大尤為明顯，呈暗紅色。血液學(xué)觀察指標(biāo)：血紅蛋白和紅細(xì)胞呈進(jìn)行性下降，網(wǎng)織紅細(xì)胞、海氏小體和白細(xì)胞總數(shù)顯著增多(顯示出貧血性血象)。注射APH 1周后，模型動(dòng)物血紅蛋白可下降為40～70g/L；紅細(xì)胞降為(200～400)×1000000000/L；白細(xì)胞降為(30～39)×1000000000/L；網(wǎng)織紅細(xì)胞則升為85％～95％，海氏小體升至30％～38％(正常為0)。血細(xì)胞組織化學(xué)染色觀察顯示中性粒細(xì)胞AKP、ACP、ATP酶、SDH和G-6-P酶均出現(xiàn)不同程度異常。
(3)比較醫(yī)學(xué) 乙酰苯肼可引起骨髓造血干細(xì)胞生長發(fā)生變化，促使其從骨髓向脾臟轉(zhuǎn)移，而在代償期出現(xiàn)骨髓血細(xì)胞增多。紅細(xì)胞因中毒加速破壞，而骨髓造血功能又代償不足，從而導(dǎo)致貧血，白細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞則急劇增多。使用APH制作溶血性貧血是較經(jīng)典的方法。近年又出現(xiàn)運(yùn)用基因打靶、轉(zhuǎn)基因等技術(shù)制作該模型，國內(nèi)應(yīng)用不廣泛，并且程序比較繁瑣、耗時(shí)多?？捎脕碇谱髂Ｐ偷膶?shí)驗(yàn)動(dòng)物包括小鼠、大鼠、家兔等。溶血性貧血是指紅細(xì)胞破壞過速而骨髓造血功能代償不足所發(fā)生的貧血。本模型表現(xiàn)的臨床癥狀及血象、血細(xì)胞生化指標(biāo)與臨床上人類的溶血性貧血基本相似，用乙酰苯肼致溶血性貧血的動(dòng)物模型是研究人類溶血性貧血的較理想的模型。
2 鹽酸苯肼誘發(fā)的溶血性貧血大鼠模型
(1)復(fù)制方法 體重約為180g的SD雄性大鼠，將鹽酸苯肼用滅菌注射用水配制成5％溶液；按40mg/kg體重的劑量經(jīng)腹腔注射鹽酸苯肼，連續(xù)注射5d。注射鹽酸苯肼5d后，將大鼠常規(guī)麻醉，經(jīng)其股靜脈抽血，作血漿游離血紅蛋白、結(jié)合珠蛋白、變性珠蛋白小體、外周血紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白、白細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞及血小板測(cè)定；并取大鼠股骨骨髓液涂片，觀察骨髓增生情況，計(jì)算粒紅比例；測(cè)定肝、脾重量，同時(shí)取動(dòng)物骨髓、肝臟、脾臟組織，經(jīng)10％甲醛溶液固定后，作常規(guī)組織切片，HE染色，光鏡下觀察。
(2)模型特點(diǎn) 注射5d后，模型大鼠表現(xiàn)為反應(yīng)遲鈍、活動(dòng)減少，尾部、口唇及四肢皮膚蒼白，尿液色深黃；紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白濃度明顯降低，網(wǎng)織紅細(xì)胞顯著增多；變性珠蛋白小體、游離Hb也增多，肝脾體積增大，重量增加，與正常對(duì)照大鼠比較有顯著差異。模型動(dòng)物鏡下病理組織學(xué)觀察顯示，骨髓血管可見少量滲血，巨核細(xì)胞系、紅系增生活躍；肝細(xì)胞呈輕、中度顆粒樣變性，肝實(shí)質(zhì)淤血；脾臟紅髓擴(kuò)大彌散，紅細(xì)胞密集，脾竇充盈紅細(xì)胞，白髓受擠壓，并可見陳舊性出血。經(jīng)大鼠腹腔注射鹽酸苯肼5d后，動(dòng)物可出現(xiàn)明顯的貧血體征，其血象和骨髓象呈溶血性貧血改變，并可造成部分組織器官的病理性損害。模型制備方法簡便，結(jié)果可靠，動(dòng)物死亡率低，實(shí)用性好。
(3)比較醫(yī)學(xué) 溶血性貧血是臨床上常見的造血系統(tǒng)疾病，目前尚無較好的治療方法。建立理想的溶血性貧血?jiǎng)游锬Ｐ停瑢?duì)研究人類溶血性貧血的發(fā)病原因與機(jī)制、藥物療效觀察均具有重要意義。本模型采用鹽酸苯肼誘發(fā)大鼠溶血性貧血，其機(jī)制主要為當(dāng)苯肼經(jīng)機(jī)體腹腔注射吸收入血后，能迅速與氧合血紅蛋白反應(yīng)，生成高鐵血紅蛋白(MHb)、氮和苯。MHb是Hb分子變性的一個(gè)重要步驟，由于機(jī)體內(nèi)MHb的血紅素比氧合Hb的血紅素更易喪失，喪失了血紅素的珠蛋白則很容易沉淀。在正常情況下，紅細(xì)胞雖不斷與氧化劑如過氧陰離子(O2-)、過氧化氫(H2O2)和過氧化脂質(zhì)等接觸，但仍可保持其完整性。紅細(xì)胞中存在三種酶，即過氧化氫酶、還原型谷胱甘肽一過氧化物酶(GSHPX)和過氧化物歧酶(SOD)，這些酶可保護(hù)紅細(xì)胞免受氧化損壞。但當(dāng)體內(nèi)O2-和H2O2的生成量超過了SOD和過氧化氫酶保護(hù)紅細(xì)胞免受氧化損害的能力時(shí)，Hb、酶蛋白和膜蛋白的巰基可被氧化，Hb氧化則形成MHb和海因茨(Heinz)小體。海因茨小體沉積在紅細(xì)胞膜上，使其流動(dòng)性降低，滲透性增加，導(dǎo)致氧化性溶血。同時(shí)苯肼可裂解一部分重要的膜功能區(qū)，在體外或注入大鼠體內(nèi)時(shí)，可抑制紅細(xì)胞膜上的 Ca依賴性ATP酶，導(dǎo)致紅細(xì)胞中的Ca濃度迅速增加。因此，推測(cè)紅細(xì)胞中Ca環(huán)境紊亂是氧化劑誘發(fā)溶血的一個(gè)重要因素；紅細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化也可加速溶血的產(chǎn)生，這是由于紅細(xì)胞中多不飽和脂肪酸和二烯鏈的喪失直接降低了膜的流動(dòng)性及膜氨基亞氨丙烯交鏈的形成，因而破壞了紅細(xì)胞膜的正常功能。
