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傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長密度，當(dāng)細(xì)胞生長密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

HPASMC人肺動脈平滑肌細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無菌，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長。來源于不同動物種類、組織類型的細(xì)胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過長導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

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phospho-GCN2 (Thr667)： 0酸化蛋白激酶GCN2蛋白抗體 CES2 Others Mouse 小鼠 CES2 / Carboxylesterase-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

CL-0188QGY-7701(人肝癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 人胰島素(INS)ELISA 試劑盒 PE PE標(biāo)記的兔抗親和素 0.1ml

Phospho-Gab1 (Tyr627)： 0酸化接頭蛋白Gab 1抗體 A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細(xì)胞株 Human

NHEM.f Pellet 正常人表皮黑素細(xì)胞團(tuán)塊(少年者) > 1 mio.cells 人腸平滑肌細(xì)胞裂解物HISMCL 人胰島淀粉樣多肽(IAPP)ELISA 試劑盒 Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗親和素 0.1ml

IL12B Protein Mouse 重組小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 大鼠腎素(REN)ELISA試劑盒 ANP(Human Atrial Natriuretic Peptide)  人心肽 96T

NFKB p52： 細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子 p52/p100抗體 CDKL2 Others Human 人 CDKL2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

小鼠腎動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒 SCF/MGF(Mouse Stem cell factor/mast cell growth factor)  小鼠干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長因子 96T

Phospho-NFKB2(Ser866+Ser870)： 0酸化細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子p100抗體 MDCK細(xì)胞，狗腎細(xì)胞 人結(jié)腸癌細(xì)胞,RKO細(xì)胞 CM-H101新生兒表皮角化細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

NAALADL1 Others Mouse 小鼠 NAALADL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA 試劑盒 SDF-1 Beta/CXCL12(Mouse Stromal cell derived factor 1 Beta)  小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β 96T

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