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傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

COLO320 HSR人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無菌，且須在無菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

FNIP1： 卵泡刺激素結(jié)合蛋白1抗體 人上皮細(xì)胞;Ca Ski

HBE細(xì)胞，人支氣管上皮細(xì)胞 小鼠飼養(yǎng)層上皮細(xì)胞,HPT-8細(xì)胞 CL-0170NG108-15(小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤之融合細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 豚鼠膽囊收縮素/腸促肽(CCK)ELISA試劑盒 Goat Anti-Bovine IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗IgG 0.1ml

FHL2： 相互作用蛋白FHL2抗體 P4HB Others Mouse 小鼠 P4HB / ERBA2L 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

卵巢顆粒細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) 豚鼠脂酶(CHE)ELISA試劑盒 Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.1ml

FADS1： 脂肪酸去飽和酶1抗體 MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 Mouse

GDNF Others Human 人 GDNF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子C(VEGF-C)ELISA試劑盒 Phaseolus vulgaris agglutinin,PHA  菜豆凝集素 96T

MEPE： 細(xì)胞外基質(zhì)0酸化抗體 人絨毛間葉成纖維細(xì)胞RNAHVMF miRNA5 μg

MKN-45人胃癌細(xì)胞 Human gasic cancer cells MKN-45 1640+10% FBS 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子C(VEGF-C)ELISA 試劑盒 Ep-CAM/CD362(Human Epithelial Cell Adhesion Molecule)  人上皮細(xì)胞粘附分子 96T

Mast Cell Tryptase： 肥大細(xì)胞蛋白酶7抗體 DKK1 Others Rhesus 恒河猴 DKK-1 / Dkk1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

MGC80-3(MGC-803)人胃癌細(xì)胞 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)ELISA試劑盒 IL-32  大鼠白介素32 96T

COLO320 HSR人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞ANGPT4 Protein Human 重組人 Angiopoietin 4 / ANG4 / ANGPT4 蛋白 (His 標(biāo)簽) 人谷酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA 試劑盒 CTBP1(C-terminal binding protein 1) C端結(jié)合蛋白1抗原 0.5mg

HRH4： 組織胺H4受體抗體 ADAM15 Others Human 人 ADAM15 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

人肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 人谷酸脫羧酶(GAD)ELISA 試劑盒 CTLA-4/CD152 淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4/細(xì)胞毒性T細(xì)胞抗原-4 0.5mg

HSD11B2： 羥基類固醇脫氫酶11β2抗體 鼬肺上皮細(xì)胞;MV-1-Lu 胰腺癌細(xì)胞，PANC-1細(xì)胞 3T3 clone A31細(xì)胞，小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

CN3 Others Rat 大鼠 Coactin 3 / CN3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 人谷酸脫氫酶(GDH)ELISA 試劑盒 CTn1 (cardiac troponin 1) 心肌肌鈣蛋白 0.5mg