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傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長密度，當(dāng)細(xì)胞生長密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

AC16人心肌細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無菌，且須在無菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長。來源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過長導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

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Promocell C-22120 Endothelial Cell GrowthMedium MV KIT, 內(nèi)皮細(xì)胞生長培養(yǎng)基MV套裝 500ml 小鼠α半乳糖基抗體(Gal)ELISA 試劑盒 SELS： 炎癥負(fù)調(diào)控因子蛋白抗體 CL-0447SW 1353(人骨肉瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

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CSF2 Others Rat 大鼠 GM-CSF / CSF2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 小鼠αN已酰基葡糖苷酶(αNAG)ELISA 試劑盒 SEMA4B： 跨膜蛋白SEMA4B抗體 人癌細(xì)胞;MCF 7B

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大鼠子宮平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠整合素α2(ITGα2)ELISA試劑盒 human IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記人IgM 0.3ml

Laminin alpha 1： 層粘蛋白α1抗體 A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細(xì)胞株 淋巴瘤細(xì)胞,U-937細(xì)胞 NCI-N87(人胃癌細(xì)胞)

IL20RB Others Rat 大鼠 IL20RB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠整合素α2(ITGA2)ELISA試劑盒 human IgA/RBITC 羅丹明標(biāo)記人IgA 0.3ml

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AC16人心肌細(xì)胞RK1(大鼠腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人抗生長激素抗體(GHAb)ELISA 試劑盒 HGV(Hepatitis G vivus) 庚型肝炎病毒(抗原) 0.5mg

HAPLN2： 透明質(zhì)酸及粘蛋白2抗體 HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Egypt/ 3300-NAMRU3/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

Saos-2人成骨肉瘤細(xì)胞 Saos-2 human osteosarcoma cells McCOY's 5A+15%FBS 人抗腎小球基底膜抗體(GBM)ELISA 試劑盒 HisX6 聚組酸標(biāo)簽蛋白 0.5mg

HAS3： 透明質(zhì)酸合成酶3抗體 狗腎細(xì)胞;Super Tube 胚胎成纖維細(xì)胞，3T6-Swiss albino細(xì)胞 Hed68細(xì)胞，果子貍腎上皮細(xì)胞

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