目錄:上海一研生物科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>糖酵解系列>> 磷酸丙糖異構(gòu)酶（TPI）生化檢測(cè)試劑盒
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更新時(shí)間：2023-11-06 19:44:10瀏覽次數(shù)：778評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣 50管/48樣 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | EY-01S1169 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 僅用于科研 |
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
磷酸丙糖異構(gòu)酶（TPI）生化檢測(cè)試劑盒 | 100管/96樣 50管/48樣 | EY-01S1169 |
測(cè)定意義
磷酸丙糖異構(gòu)酶是重要的糖酵解酶，廣泛存在于動(dòng)植物及微生物體內(nèi)，在機(jī)體內(nèi)參與糖代謝，在糖酵解，糖異生、脂肪酸生物合成及磷酸戊糖代謝中都發(fā)揮著重要作用。
測(cè)定原理
磷酸丙糖異構(gòu)酶將磷酸二羥丙酮轉(zhuǎn)化為3-磷酸甘油醛，3-磷酸甘油醛與NAD在3-磷酸甘油醛脫氫酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH，340nm處的吸光度變化反映了磷酸丙糖異構(gòu)酶的活性的高低。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）。
試劑一：液體×1瓶，室溫保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×2瓶，－20℃保存。臨用前加入22mL試劑二，現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑四：液體×1支，4℃保存。
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測(cè)。
2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測(cè)。
3、血清等液體：直接測(cè)定。
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T
=1608×△÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T
=1608×△A
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min。
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