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制備單克隆抗體時(shí)有哪些具體步驟

閱讀：673 發(fā)布時(shí)間：2023-12-19

一抗可用于檢測(cè)糖尿病、癌癥、阿爾茨海默病和帕金森病的生物標(biāo)志物。二抗則主要用于檢測(cè)和純化抗原蛋白。二抗在標(biāo)記和檢測(cè)方面比較靈敏和靈活。所以，它們?cè)诹魇郊?xì)胞術(shù)、蛋白質(zhì)印跡和細(xì)胞成像等一系列應(yīng)用中用于一抗的比色、化學(xué)發(fā)光和熒光檢測(cè)。二抗類型的選擇基于一抗的類別：免疫球蛋白IgG或IgM、標(biāo)簽類型和來源宿主。

制備單克隆抗體時(shí)有哪些具體步驟：

一、免疫動(dòng)物選擇

根據(jù)需要產(chǎn)生目標(biāo)抗原的免疫反應(yīng)，選擇合適的免疫動(dòng)物。例如，小鼠是免疫動(dòng)物之一，因其易于操作且在免疫應(yīng)答方面較為強(qiáng)大。

二、抗原免疫

將目標(biāo)抗原注射到免疫動(dòng)物體內(nèi)，通常需要多次免疫以激發(fā)免疫反應(yīng)?？梢赃x擇不同的免疫路線，如皮下、腹腔、靜脈等。

三、細(xì)胞融合

從免疫動(dòng)物獲得脾細(xì)胞或淋巴細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞或其他癌細(xì)胞（如SP2/0、NS0等）融合，形成雜交瘤細(xì)胞。融合細(xì)胞通常使用（PEG）或電穿孔等方法促進(jìn)細(xì)胞融合。

四、雜交瘤細(xì)胞篩選

對(duì)融合細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般使用HAT選擇性培養(yǎng)基，通過對(duì)非雜交瘤細(xì)胞和單克隆雜交瘤細(xì)胞的抗代選擇，篩選出產(chǎn)生目標(biāo)抗體的單克隆雜交瘤細(xì)胞。

五、單克隆抗體生產(chǎn)

從篩選出的單克隆雜交瘤細(xì)胞中獲取單一細(xì)胞系，并進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)和產(chǎn)生抗體。一般可采用體外或體內(nèi)方式。

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制備單克隆抗體時(shí)有哪些具體步驟

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