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          上海一研生物科技有限公司

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          人血吸蟲抗體(IgM)ELISA試劑盒?操作步驟

          閱讀:960      發(fā)布時間:2021-11-16
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          人血吸蟲抗體(IgM)ELISA試劑盒操作步驟:


          1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

          2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

          3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

          4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

          5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

          6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

          7. 溫育:操作同3。

          8. 洗滌:操作同5。

          9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

          10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

          11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘。

          HUVEC-12, 人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞系

          HUM, 正常人主動脈平滑肌細胞

          HAVSMC, 人主動脈平滑肌細胞

          LX-2, 人肝星形細胞株

          3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞

          C2C12, 小鼠肌原細胞

           細胞名稱

          MCF-7(MCF7)(ATCC來源), 人乳腺癌細胞

          MDA-MB-231(ATCC來源), 人乳腺癌細胞

          Raji,人Burkitt's淋巴瘤細胞

          Saos-2,人成骨肉瘤細胞

          Caco-2,人結(jié)直腸腺癌細胞

          NCI-N87 [N87]人胃癌細胞

          MGC80-3(MGC-803)人胃癌細胞

          EC109,人食管癌細胞

          HGC-27人胃癌細胞

          AGS人胃腺癌細胞

          U251人膠質(zhì)瘤細胞

          THP-1人單核白血病細胞

          HuH-7人肝癌細胞

          SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細胞

          A549, 人肺癌細胞系

          SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐藥細胞株

          A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細胞株

          A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株

          SP2/0, 小鼠骨髓瘤細胞

          WM35, 人黑色素瘤細胞

          BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株

          U-2 OS, 人骨肉瘤細胞

          WM451, 人黑色素瘤細胞

          SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞


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