維生素CELISA試劑盒進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇包括:
(1)固相載體的選擇:不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選,用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2)酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份),然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(3)ELISA試劑盒包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間,吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。
一、準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
二、靈敏度:zui低檢測(cè)濃度小于1.0 ng/mL。
三、特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
四、重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
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