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          小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體elisa試劑盒樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備步驟

          閱讀:740      發(fā)布時(shí)間:2020-3-12
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          小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體elisa試劑盒樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
          ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
          1血清
          室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
          2血漿:
          應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
          3尿液:
          用無菌管收集。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
          4細(xì)胞培養(yǎng)上清:
          檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分。仔細(xì)收集上清。
          5培養(yǎng)細(xì)胞
          檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBSPH7.2-7.4稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
          6組織標(biāo)本
          切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4,或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
           

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