重組雙堿性氨基酸內(nèi)肽酶（RKex2）
◆概述
Kex-2（E.C.3.4.21.61）屬于枯草桿菌蛋白酶家族，為酵母自身編碼的一種前體加工酶，Ca2+ 依賴(lài)型絲氨酸蛋白酶，能夠?qū)Ｒ恍缘刈R(shí)別和切割Lys-Arg，Arg-Arg，Pro-Arg等雙堿性氨基酸※ 的羧基端肽鍵。不同于Trypsin，該酶不能識(shí)別和切割單一堿性氨基酸（Arg或Lys）的羧基端肽鍵。

重組雙堿性氨基酸內(nèi)肽酶（RKex2）

 

 

 

 

 

◆概述

 

Kex-2（E.C.3.4.21.61）屬于枯草桿菌蛋白酶家族，為酵母自身編碼的一種前體加工酶，Ca²⁺ 依賴(lài)型絲氨酸蛋白酶，能夠?qū)Ｒ恍缘刈R(shí)別和切割Lys-Arg，Arg-Arg，Pro-Arg等雙堿性氨基酸^※ 的羧基端肽鍵。不同于Trypsin，該酶不能識(shí)別和切割單一堿性氨基酸（Arg或Lys）的羧基端肽鍵。常在酵母表達(dá)外源蛋白前體中加入Kex-2識(shí)別位點(diǎn)，便于外源蛋白前體加工。該酶適pH為9.0，在偏酸性環(huán)境中穩(wěn)定，穩(wěn)定pH為5.0-6.0。適溫度為37 ℃，酶活性不受常規(guī)絲氨酸蛋白酶抑制劑（如PMSF、TPCK等）抑制。

 

※堿性氨基酸：水解生成的氫氧根負(fù)離子多于氫正離子的氨基酸，其特點(diǎn)是側(cè)鏈常含有可質(zhì)子化的堿性化學(xué)基團(tuán)。包括以下三種：

 

中文名	英文名	縮寫(xiě)	符號(hào)	等電點(diǎn)
精氨酸	Arginine	Arg	R	10.76
賴(lài)氨酸	Lysine	Lys	K	9.74
組氨酸	Histidine	His	H	7.59

 

 

◆優(yōu)勢(shì)

 

●　單批次產(chǎn)量大，批間差小

●　高純度，高比活性

●　無(wú)外源性病毒污染，無(wú)動(dòng)物源生產(chǎn)原料

 

 

◆純度

 

SDS-PAGE顯示純度>90%。

 

 

◆使用方法

 

溶解緩沖：20 mmol/L NaAc-HAc，2 mmol/L Ca²⁺，pH 5.0~5.5。

酶切體系：50~100 mmol/L Tris，2 mmol/L Ca²⁺，pH 7.0~9.0；或HEPES，5 mmol/L  Ca²⁺，pH 7.0~9.0；

推薦使用量：蛋白酶：融合蛋白質(zhì)量比1：20~1：1000

 

 

◆保存條件

 

儲(chǔ)存穩(wěn)定性：凍干粉存于-15 ℃以下，24個(gè)月穩(wěn)定；20 mmol/L NaAc-HAc，2 mmol/L Ca²⁺，

儲(chǔ)存穩(wěn)定性：pH 5.0~5.5溶解后分裝儲(chǔ)存于-15 ℃以下，避免反復(fù)凍融；溶解后2~8 ℃保存建議不超過(guò)24 h。

運(yùn)輸穩(wěn)定性：冰袋保溫運(yùn)輸，活性穩(wěn)定。

 

 

◆應(yīng)用實(shí)例

 

RKex-2特異性酶切合成短肽

合成多肽序列YGKRLWK,理論酶切位點(diǎn)酶切產(chǎn)物YGKR及LWK，蛋白酶：合成多肽質(zhì)量比1：1000，37 ℃酶切反應(yīng)10 min，LC-MS驗(yàn)證酶切反應(yīng)特異性。

 

 

Peak#	R.T.	M.W.	Sequence
Peak 1	2.79 min	522.6	YGKR
Peak 2	6.26 min	445.56	LWK
Peak 3	6.94 min	950.15	YGKRLWK

 

 

◆產(chǎn)品信息

 

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	規(guī)格	比活
RKex20202	RKex2	10 mg	10 U/mg
RKex20204	RKex2	10 μg	10 U/mg

 

 

◆相關(guān)產(chǎn)品

 

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	規(guī)格	儲(chǔ)存溫度	檢測(cè)范圍
MDRK0201	重組雙堿性?xún)?nèi)肽酶檢測(cè)試劑盒	96 孔	2～8 ℃	1.0～4000 ng/mL