GenomONE™-Neo EX仙臺(tái)病毒包膜轉(zhuǎn)染試劑
原理
待轉(zhuǎn)移的分子（如DNA，蛋白，Antisense Oligonucleotide, siRNA等）與HVJ-Envelope （HVJ-E） 混合后，形成了HVJ-E載體。利用病毒衣殼蛋白的侵染能力，在融合蛋白（F）的作用下，直接與細(xì)胞融合，將分子轉(zhuǎn)入目標(biāo)細(xì)胞或組織。

GenomONE^®-Neo EX 仙臺(tái)病毒包膜轉(zhuǎn)染試劑

可用于DNA、siRNA、ODN及蛋白轉(zhuǎn)染！

 

 

◆原理

 

 

　　待轉(zhuǎn)移的分子（如DNA，蛋白，Antisense Oligonucleotide, siRNA等）與HVJ-Envelope (HVJ-E) 混合后，形成了HVJ-E載體。利用病毒衣殼蛋白的侵染能力，在融合蛋白(F)的作用下，直接與細(xì)胞融合，將分子轉(zhuǎn)入目標(biāo)細(xì)胞或組織。

 

　　*　HVJ-E：Hemagglutinating Virus of Japan Envelope。

　　** 現(xiàn)已有200多篇文獻(xiàn)使用該試劑盒，如需樣本案例，請(qǐng)向我司索取。

 

 

◆優(yōu)點(diǎn)、特色

 

      目前市面上少有的轉(zhuǎn)染試劑盒，可用于細(xì)胞、組織和活體動(dòng)物。可用于：

 

siRNA
      少量siRNA也可高效發(fā)揮敲除作用，無需化學(xué)修飾siRNA，高表達(dá)量。
 

DNA
      無論序列長(zhǎng)短、線性或環(huán)狀均可
 

Oligonucleotides
      DNA、RNA
 

蛋白
      保持酶和抗體的功能性與特異性
 

體內(nèi)轉(zhuǎn)染 !!
      大量操作和文獻(xiàn)引用證明HVJ-E載體可直接將目標(biāo)分子轉(zhuǎn)移到活體動(dòng)物產(chǎn)生作用。
 

高通量篩選
      可同時(shí)轉(zhuǎn)染多種分子

1.　運(yùn)用范圍廣
     GenomONE HVJ-E載體試劑盒可將多種分子（質(zhì)粒DNA、siRNA、寡核苷酸、蛋白、抗體等）轉(zhuǎn)進(jìn)培養(yǎng)細(xì)胞（貼壁和非貼壁細(xì)胞）和組織。也可用于敏感原代細(xì)胞和 活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染。每種領(lǐng)域的GenomONE^®-Neo EX運(yùn)用情況，均有大量文獻(xiàn)報(bào)道。（如需文獻(xiàn)列表，請(qǐng)向我司索取）

 

2.　安全性
     與陽離子脂質(zhì)體不同，GenomONE^®-Neo EX是通過膜融合作用將分子導(dǎo)入細(xì)胞，而脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的內(nèi)吞作用可能造成轉(zhuǎn)染分子經(jīng)溶酶體作用而降解。GenomONE^®-Neo EX內(nèi)含*滅活的HVJ病毒顆粒，其具有侵染力而無潛在增殖能力，使用非常安全，無需特殊的防護(hù)措施    

 

3.　方便簡(jiǎn)單
     GenomONE 即開即用，試劑盒內(nèi)包含了操作中主要使用的HVJ-E凍干粉和各種輔助試劑      

  

◆案例、應(yīng)用

 

　　GenomONE^®-Neo EX和傳統(tǒng)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染和電穿孔法相比，有更高的轉(zhuǎn)染效率和更低的細(xì)胞毒性，可更有效的發(fā)揮siRNA的knock-down作用。

 

■ in vivo

 

【大鼠頜下腺逆行注射siRNA】

　　Ca²⁺-dependent Cl channel protein (rCLCA)表達(dá)的特異性抑制。

 

免疫染色

 

 

　　　　　　

　　　non-injection side     　　　　　　　rCLCA siRNA-injection side

 

　　rCLCA siRNA（2 nmol）和GenomONE-Neo（2AU）混合后，以逆行注射的方式注入大鼠頜下腺。四十八小時(shí)后，用免疫染色檢驗(yàn)siRNA注射對(duì)氯離子通道蛋白表達(dá)的抑制作用。
　　ST：紋狀管，G：顆粒曲管，A：腺泡

　　【相關(guān)文獻(xiàn)】

　　K. Ishibashi et al., J. Dent. Res., 85(12), 1101-1105 (2006).

 

■ in vitro

 

【難轉(zhuǎn)染細(xì)胞——U937細(xì)胞RNAi】

 

　　總所周知，用脂質(zhì)體和電轉(zhuǎn)的方法將siRNA轉(zhuǎn)到U937人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞中非常困難，但我們通過實(shí)驗(yàn)證明，siRNA與GenomONE-Neo結(jié)合后轉(zhuǎn)染該細(xì)胞，其knock-down效率可達(dá)85%以上。

 

♦ U937細(xì)胞經(jīng)siRNA轉(zhuǎn)染72小時(shí)后收集，用RT-PCR和WB分別檢測(cè)mRNA和蛋白量的變化情況。

Real-time PCR　　　　　　　　　　　　            　Western blotting

　　　　　　

 

 

　　左圖：轉(zhuǎn)染Cathepsin G的特異性siRNA后，其對(duì)應(yīng)的mRNA減少到14%

　　右圖：轉(zhuǎn)染Cathepsin G的特異性siRNA后，其蛋白水平減少到15%

 

　【相關(guān)文獻(xiàn)】 
　　Y. Tsuchiya et al, Free Radical Biology & Medicine, 43, 1604-1615 (2007).

 

◆試劑盒組成

 

產(chǎn)品編號(hào)	凍干 HVJ-E (滅活HVJ)  0.26 mL/vial   (重組時(shí))	試劑A (增強(qiáng)融合)  0.5 mL/vial	試劑B (融合試劑)  0.3 mL/vial	試劑C (增強(qiáng)導(dǎo)入)  1.0 mL/vial	緩沖液 (用于懸浮和稀釋?)  6.5 mL/vial
385-18731	1 vial	1 vial	1 vial	1 vial	1 vial
381-18733	4 vials	1 vial	1  vial	1  vial	1 vial
385-18736	40 vials	10 vials	10 vials	10 vials	10 vials

 

 

◆產(chǎn)品列表

 

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
385-18731	GenomONE® Neo EX（FD）轉(zhuǎn)染試劑套裝	1 set
381-18733		4 sets
389-18734		16 sets
385-18736		40 sets