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詳細介紹
VA-044（聚合物引發(fā)劑）?
一個世紀以來，生物學家們一直夢想著能夠透過器官甚至整個機體，親眼看到細胞連接和精細結(jié)構(gòu)，現(xiàn)在隨著組織透明化技術(shù)的完善，這一夢想終于成為了現(xiàn)實。
◆原理
VA-044 作為組織透明化技術(shù)中起關(guān)鍵作用的水溶性偶氮引發(fā)劑，普遍適用于高分子合成的水溶液聚合與乳液聚合。在CLARITY 方法中，VA-044 作為引發(fā)劑，催化丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺和PFA 形成水凝膠。
2013 年3 月，斯坦福大學的Karl Deisseroth 博士的團隊在自然雜志（Nature）上發(fā)表了Structural and molecularinterrogation of intact biological systems 的論文，文中介紹了制備組織的方法CLARITY。該方法是將組織浸透在水凝膠單體溶液中（Hydrogel Monomer Solution）中，經(jīng)電泳使組織呈現(xiàn)透明。這種水溶膠—組織雜交的方式可以維持組織的原有結(jié)構(gòu)，使生物分子結(jié)合到水凝膠的網(wǎng)孔上。重要的是脂類不會結(jié)合到水凝膠上，因而可以通過這種方式將脂類有效去除。通過這種方法制備的組織樣品可用于后期的影像實驗，免疫染色，原位雜交等實驗。
CLARITY可用于熒光蛋白質(zhì)和抗體的免疫染色，可作為解析腦神經(jīng)回路的有效工具。VA-044是論文實驗步驟中透明化工程的使用試劑。
◆特點• 優(yōu)勢
● 操作簡單，固定蛋白后只需進行電泳；
● 可保持組織、器官和全身結(jié)構(gòu)的完整性；
● 可進行原位雜交和免疫組化實驗，可進行多輪染色和脫色步驟；
◆案例•應(yīng)用
Clarity 介紹
PARS 介紹
2014 年7 月，加州理工學院的研究團隊在細胞雜志（Cell）上發(fā)表論文Single-Cell Phenotyping within TransparentIntact Tissue through Whole-Body Clearing，將CLARITY 技術(shù)推進到一個新的高度——全身組織透明化技術(shù)，稱為PARS(Perfusion-assisted Agent Release in Situ)。這種技術(shù)將透明劑持續(xù)泵入動物的循環(huán)系統(tǒng)從而進入各個組織，或者通過腦脊液管道泵入大腦，再去除脂質(zhì)，使器官和生物體被高分子滲透而呈現(xiàn)透明，并可用熒光抗體分析和揭示具有完整連接性的細胞結(jié)構(gòu)和三維細胞排列。
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圖A. PARS 建立的小鼠透明化腸，并用凝集素（lectin） 亞甲基藍(methylene blue)、DAPI 進行免疫標記后成像，并獲得三種免疫標記的疊加圖（merge） | 圖B. PARS 建立的小鼠透明化腎臟并用抗微管蛋白抗體 和DRAQ5 進行免疫標記后成像，并獲得兩種免疫 標記的疊加圖 |
CLARITY處理的小鼠腦
CLARITY處理的小鼠大腦成像
CLARITY處理的Thy1-YFP（H Line）小鼠大腦的熒光觀察
（A）從大腦皮質(zhì)到海馬的3-D觀察圖像
（B）大腦皮層Ⅴ層的錐體細胞的樹突圖像
拍攝條件：雙光子 使用設(shè)備：Olympus FV1000直立顯微鏡，25倍浸液物鏡
CLARITY+抗體處理的小鼠大腦成像
CLARITY處理后，用Iba1抗體染色Thy1-YFP（H線）小鼠大腦的熒光觀察
（A）在大腦皮質(zhì)的小膠質(zhì)細胞的3-D觀察圖像
（B）從表面層觀察皮質(zhì)Ⅰ層的圖像
拍攝條件：單光子 使用設(shè)備：Olympus FV1000直立顯微鏡，25倍浸液物鏡
◆產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 包裝 |
| 223-02112 | VA-044 | 細胞生物學 | 25 g |
| 225-02111 | VA-044 | 細胞生物學 | 100 g |
| 227-02115 | VA-044 | 細胞生物學 | 500g |
| 019-19741 | 小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞特異性蛋白抗體(免疫組化) | 免疫化學用 | 50μg |
VA-044（聚合物引發(fā)劑）?
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