詳細(xì)介紹
GenomONE ® -CF EX
GenomONE ® 仙臺病毒包膜細(xì)胞融合試劑
GenomONE®-CF EX含有仙臺病毒包膜和緩沖液,可促使細(xì)胞融合。適用于貼壁或者懸浮狀態(tài)的任何細(xì)胞。僅僅需要30分鐘就可完成融合細(xì)胞及制造混合動力的操作。
◆用途
● 腫瘤疫苗·癌癥免疫研究
● 癌細(xì)胞和樹突細(xì)胞融合等
● 再生醫(yī)療·細(xì)胞治療研究
● 臟器來源細(xì)胞和干細(xì)胞融合等
● 單克隆抗體的制備
● 抗原B細(xì)胞和髓過氧化物酶細(xì)胞融合
● 分生·分化·育種研究
● 對脫核未受精卵的核移植(核置換)
● 其他
● PEG&電融合的使用介紹
◆HVJ Envelope(HVJ-E):
HVJ包膜(HVJ-E)是*滅活和純化仙臺病毒(HVJ*),即只留下細(xì)胞膜融合能力的衣殼蛋白包膜。仙臺病毒的HN蛋白可與細(xì)胞膜外的唾液酸受體結(jié)合,通過F蛋白的作用,引起細(xì)胞膜融合。在HVJ-E中,仙臺病毒的基因組RNA已經(jīng)*失活,在人類和實驗動物體內(nèi)不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和設(shè)備,它可以安全地在普通的實驗室使用。
*HVJ:日本仙臺病毒
◆HVJ-E細(xì)胞融合原理
在低溫(0 - 8℃)條件下,每一個細(xì)胞與數(shù)百個以上的HVJ - E接觸,HVJ - E與細(xì)胞膜上的唾液酸受體結(jié)合,通過細(xì)胞表面吸附(步驟1),細(xì)胞通過HVJ-E相互連接(步驟2),形成細(xì)胞彼此聚集的狀態(tài)。當(dāng)該細(xì)胞/ HVJ-E的復(fù)合物加熱到37℃時,細(xì)胞膜干擾就會進一步擴大,細(xì)胞膜內(nèi)膜結(jié)構(gòu)也暫時改變。這種變化是短暫的,隨后會立即返回到正常結(jié)構(gòu),但是在這個期間,細(xì)胞膜利用強疏水性結(jié)合力進行相互融合(步驟3)。
步驟一 | 步驟二 | 步驟三 |
◆應(yīng)用方法
懸浮法 | 電鍍法 |
◆懸浮細(xì)胞融合案例
同種細(xì)胞融合
異種細(xì)胞融合
熒光標(biāo)記的紅(* 1)細(xì)胞和綠色熒光標(biāo)記(* 2)細(xì)胞(每1.0×105個)在融合緩沖液50 μL混合后,加入HVJ-E冰敷5分鐘,隨后37℃下反應(yīng)15分鐘后,融合細(xì)胞(黃色)進行了觀察。
◆黏著態(tài)和懸浮態(tài)細(xì)胞融合案例
在粘合狀態(tài)BHK-21(紅)和在浮動狀態(tài)(綠色)的P19細(xì)胞的融合
膠粘狀態(tài)的HeLa S3(紅)在浮動狀態(tài)(綠色)的P19細(xì)胞的融合
熒光標(biāo)記的(* 1)中的紅,附著的細(xì)胞在12孔平板,綠色熒光標(biāo)記(* 2)中,添加預(yù)先準(zhǔn)備的HVJ-E,來處理漂浮細(xì)胞1×105個的懸浮液(融合緩沖污染),并在室溫下離心(1000轉(zhuǎn)),每個板5分鐘。隨后孵育37℃15分鐘后,更換增殖用的培養(yǎng)基繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)。觀察3個小時后的融合細(xì)胞(黃色)。
◆和PEG法的比較
?
紅色熒光標(biāo)志(* 1)的ratMSC(骨髓由來老鼠間葉系細(xì)胞)和綠色熒光標(biāo)識的老鼠原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞2×105個融合緩沖液50 μL中混合后,添加HVJ – E,冰浴5分鐘,然后37℃孵育反應(yīng)15分鐘,觀察融合細(xì)胞(黃色)。1 - 2日培養(yǎng)后,觀察到粘著的融合細(xì)胞。在PEG法中融合緊接之后細(xì)胞毒性強烈,融合細(xì)胞的數(shù)量很少。
◆安全性說明
HVJ-E失活的確認(rèn)(確認(rèn)無感染性病毒的存在)
1. | 細(xì)胞增值實驗(熒光灶單元(FFU)法) 處理LLC-MK2細(xì)胞,一到兩天后,病毒生長性的HVJ融合蛋白F抗體通過熒光抗體法測定,已證實未檢測到病毒蛋白。<制造階段實驗> |
2. | 受精卵生長試驗(血凝單位測定) 處理受精卵,3天后的病毒增殖,包括在HVJ表面的HN蛋白的紅血細(xì)胞聚合活性(HAU)測量作為指標(biāo),已經(jīng)證實,沒有看到病毒的生長。<制造階段實驗> |
3. | 小鼠感染性研究 鼻腔給藥小鼠和未處理小鼠(SIX周)在相同籠中飼養(yǎng),通過測定血清中的抗HVJ抗體滴度進行了個體之間感染性的檢測。其結(jié)果是,在非給藥的情況下未觀察到抗體滴度增加,表明未感染HVJ-E。 |
4. | 動物個體的遺傳基因?qū)雽嶒?/span> 小鼠、大鼠等實驗動物的各種藥物實驗(肺、氣管、肝和靜脈等)。已證實*沒有病毒感染或是可疑的事例。 |
◆產(chǎn)品列表
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
388-18721 | GenomONE®-CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE®- CF EX 仙臺病毒包膜(1只裝)細(xì)胞融合試劑 | 1 set |
384-18723 | 4 sets | |
382-18724 | 16 sets |