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人蛋白酶3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)ELISA 試劑盒

本試劑僅供研究使用

試驗(yàn)原理：

PR3-ANCA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知PR3-ANCA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將PR3-ANCA和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中PR3-ANCA的活性濃度呈比例關(guān)系。

人蛋白酶3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)ELISA 試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制

自備材料

1．  蒸餾水。

2．  加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．  振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1．  避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

2．  實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3．  不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人蛋白酶3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)ELISA 試劑盒操作注意事項(xiàng)

1．  試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

2．  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3．  不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4．  使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5．  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6．  洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7．  底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8．  加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

9．  按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、  血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、  血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、  細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、  保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人蛋白酶3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)ELISA 試劑盒試劑的準(zhǔn)備

1．  標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：

2．  洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1．  使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2．  根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3．  加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。

4．  甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5．  每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6．  甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7．  每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8．  取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。

9．  在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

性能

1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

4.局限性：6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到精確的結(jié)果。

結(jié)果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的PR3-ANCA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的PR3-ANCA含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測(cè)值范圍：0-400ng/ml

4、敏感度： 1.0ng/mlxy-E11094 【中文名稱】：人超氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒 【英文名稱】：Human superoxide dismutase (SOD) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E11095 【中文名稱】：人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒 【英文名稱】：Human dipeptidyl peptidase Ⅳ (DPP Ⅳ) ELISA Kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E11096 【中文名稱】：人組織蛋白去乙?；?HD)ELISA試劑盒 【英文名稱】：Human histone deacetylase (HD) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E11097 【中文名稱】：人甲基化酶(Methylase)ELISA試劑盒 【英文名稱】：Human methylase (Methylase) ELISA Kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E11098 【中文名稱】：人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒 【英文名稱】：People tartrate-resistant acid phosphatase 5b (TRACP-5b) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E11099 【中文名稱】：人磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA試劑盒 【英文名稱】：People phosphoinositide 3-kinase (PI3K) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E11100 【中文名稱】：人蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒 【英文名稱】：Human protein kinase B (PKB) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E11101 【中文名稱】：人血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA試劑盒 【英文名稱】：Human heme oxygenase 2 (HO-2) ELISA Kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E11102 【中文名稱】：人丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA試劑盒 【英文名稱】：Human pyruvate kinase M2 isoenzyme (M2-PK) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E11103 【中文名稱】：人甲狀腺過(guò)氧化物酶(TPO)ELISA試劑盒 【英文名稱】：Human thyroid peroxidase (TPO) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E11104 【中文名稱】：人αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA試劑盒 【英文名稱】：Human αL fucosidase (AFU) ELISA Kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E11105 【中文名稱】：人內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒 【英文名稱】：Human endothelial nitric oxide synthase (eNOS) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E11106 【中文名稱】：人血紅素氧合酶1(HO-1)ELISA試劑盒 【英文名稱】：Human heme oxygenase 1 (HO-1) ELISA Kit 【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E11107 【中文名稱】：人誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒 【英文名稱】：Human inducible nitric oxide synthase (iNOS) ELISA kit 【靈敏度】：9.375pg/mL