一站式全血mRNA OUT產(chǎn)品及特點(diǎn)
構(gòu)建cDNA文庫、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR方法檢測稀有的mRNA等研究常常
需要從總RNA中分離mRNA，mRNA只占總RNA的1%左右，但由于帶poly(A)尾巴，
所以可以通過與Oligo(dT) 纖維素的親和結(jié)合而與其他RNA（如rRNA、tRNA等）分離
開。本產(chǎn)品專門用于從全血中一站式提取mRNA，一站式全血mRNA OUT其操作流程如下：
它具有下列特點(diǎn)：
1. 一站式，是由天恩澤的高效、血液RNA提取試劑和mRNA提取試劑兩個(gè)產(chǎn)品整
合而成，即開即用，非常方便。
2. 一次可以處理0.5-1.5 mL的全血，能得到約2-3 μg總RNA，其中1-5%為
mRNA。
3. 提供的Oligo(dT)纖維素吸附能力強(qiáng)，每克可以吸附50-80 OD的mRNA，相當(dāng)
于2000-3000 μ g mRNA。
4. mRNA提取過程操作簡單，只需要離心就可以完成，免去了常規(guī)的灌柱、洗柱
等繁瑣操作，樣品也不會(huì)被稀釋。
5. 得到的mRNA可以直接用于構(gòu)建cDNA文庫、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR。
使用及效果
*步，用血液RNA OUT 的方法提取全血總RNA，zui后用50μL洗脫，將兩管收
集在一起，共得到100μL總RNA（詳見柱式血液RNA OUT 的使用手冊）。
第二步，從總RNA中純化mRNA：將0.5 mL 溶液A（結(jié)合液）加入到一管裝有
Oligo(dT)纖維素的離心管中，放置5分鐘后離心吸棄上清后待用。將制備的總RNA
100μL加熱到65℃ 5分鐘后加入等體積的溶液A，轉(zhuǎn)移到裝有Oligo(dT)纖維素的離
心管中，顛倒混勻數(shù)次，離心后將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)離心管中。用0.5 mL溶液A，混
勻后4℃ 200g 離心5分鐘，小心棄上清。重復(fù)上步洗3-5次，用RNase-free水洗脫
mRNA。
第三步，如果需要濃縮，可用微量核酸沉淀劑沉淀mRNA（詳見微量核酸沉淀
劑使用手冊）。
注：所得mRNA只占總RNA的5%左右，很微量很珍貴，一般不宜電泳檢測。100307-10    酸洗玻璃珠系列    10g    190    2-106
100405-100    SSC 溶液 ,20×    100mL    120    4-14
100406-10    溶菌酶干粉    10g    195    10-105
100408-100    DNA 級鹽酸胍溶液，8M    100mL    90    2-109
100409-5    6nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL    5μg    90    5-30
100410-1    超快轉(zhuǎn)染試劑盒    1mL    1997    8-23
100502-20    高效 E.coli 感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒    20 次    390    6-23
100538-10    鈣蛋白酶抑制劑Ⅱ溶液，10mg/mL    10mL    90    7-61
100539-1    胰凝乳蛋白酶抑制劑溶液，20mg/mL    1mL    490    7-61
100601-50    細(xì)胞核微量制備試劑盒    50 次    590    8-19
100602-250    干粉型 LB 培養(yǎng)基    250g    390    6-40
100603-30    銀染清除劑    30 次    990    7-91
100604-1    鮭魚精 DNA 溶液    1mL    190    4-16
100802-100    重蒸酚    100mL    50    1-64
100803-100    酸酚    100mL    120    1-65