一站式動(dòng)物mRNA OUT產(chǎn)品及特點(diǎn)
構(gòu)建cDNA文庫、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR方法檢測稀有的mRNA等研究常
常需要從總RNA中分離mRNA，mRNA只占總RNA的1%左右，但由于帶poly(A)尾
巴，所以可以通過與Oligo(dT)纖維素的親和結(jié)合而與其他RNA（如rRNA、tRNA
等）分離開。一站式動(dòng)物mRNA OUT本產(chǎn)品專門用于從動(dòng)物組織中提取mRNA，其操作步驟如下：
它具有下列特點(diǎn)：
1. 一站式，由柱式動(dòng)物RNA提取試劑和mRNA提取試劑兩個(gè)產(chǎn)品整合而成，即開
即用，非常方便。
2. 一次可以處理50-100 mg的動(dòng)物組織，能得到約10-15 μ g總RNA，從中可得
0.1-0.5 μ g左右的mRNA。
3. Oligo(dT)纖維素吸附能力強(qiáng)，每克可以吸附50-80 OD的mRNA，相當(dāng)于
2000-3000 μ g mRNA。
4. mRNA提取過程操作簡單，只需要離心就可以完成，免去了常規(guī)的灌柱、洗柱
等繁瑣操作。
5. 得到的mRNA可以直接用于構(gòu)建cDNA文庫、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR。
使用及效果
1. 用柱式動(dòng)物RNA OUT 的方法提取動(dòng)物總RNA，zui后用50μL洗脫，將兩管收集
在一起，共得到100μL總RNA（詳見柱式動(dòng)物RNA OUT 的使用手冊）。
2. 從總RNA中純化mRNA：將0.5 mL 溶液A（結(jié)合液）加入到一管裝有
Oligo(dT)纖維素的離心管中，放置5分鐘后離心吸棄上清后待用。將制備的總RNA
100μL加熱到65℃ 5分鐘后加入等體積的溶液A，轉(zhuǎn)移到裝有Oligo(dT)纖維素的離
心管中，顛倒混勻數(shù)次，離心后將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)離心管中。用0.5 mL溶液A，混
勻后4℃ 200 g 離心5分鐘，小心棄上清。重復(fù)上步洗3-5次。用DEPC水洗脫并收
集mRNA。
3. 用微量核酸沉淀劑沉淀mRNA（詳見微量核酸沉淀劑使用手冊）。
注：所得mRNA只占總RNA的5%左右，很微量很珍貴，一般不宜電泳檢測。101210-10    DNA 級(jí) DTT( 二硫代蘇糖醇 )    10g    90    2-110
101211-100    DNA 級(jí) EDTA 2Na    100g    90    2-110
101212-100    DNA 級(jí) Guanidine HCl( 鹽酸胍 )    100g    90    2-110
101213-100    DNA 級(jí) GuSCN( 異硫氰酸胍 )    100g    90    2-110
101214-50    DNA 級(jí) 2-Mercaptoethanol( )    50mL    90    2-110
101215-100    DNA 級(jí) PVP K30( 聚乙烯基吡咯烷酮 K30)    100g    90    2-110
101216-100    DNA 級(jí) Sarkosyl( 十二烷基肌氨酸鈉 )    100g    90    2-110
101217-100    DNA 級(jí) SDS( 十二烷基硫酸鈉 )    100g    90    2-110
101218-100    DNA 級(jí) Tris Base( 三羥甲基氨基甲烷 )    100g    90    2-110
101219-300    即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒    300 次    5900    5-35
101219-50    即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒    50 次    1090    5-35
101220-100    RNA 級(jí) CTAB ( 十六烷基*基溴化銨 )    100g    190    1-67
101221-10    RNA 級(jí) DTT ( 二硫代蘇糖醇 )    10g    190    1-67
101222-1.5    DNA 堿性膠上樣液 ,6×    1.5mL    50    3-10