VitK3聯(lián)合吡柔比星抑制人膀胱癌BIU-87細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)分析與PTEN基因蛋白表達(dá)的相關(guān)性研究

王維

南華大學(xué)

摘要：背景:膀胱癌(Bladder cancer)是泌尿系統(tǒng)zui常見的惡性腫瘤,也是全身常見腫瘤之一,其發(fā)病率在我國呈逐年升高趨勢。表淺性膀胱癌為膀胱癌的早期類型,常規(guī)行經(jīng)尿道膀胱腫瘤切除術(shù)(TURBT術(shù))后得到一定治療,但單一手術(shù)復(fù)發(fā)率高,術(shù)后結(jié)合吡柔比星等藥物進(jìn)行規(guī)律膀胱灌注可以降低復(fù)發(fā)概率,表明吡柔比星聯(lián)合治療在治療膀胱癌患者中具有協(xié)同作用。Vit3為人體肝臟合成原酶必需物質(zhì),參與相關(guān)凝血因子合成,具有利尿增加解毒功能,參與細(xì)胞膜性物質(zhì)修復(fù)功能,同時(shí)近來國內(nèi)外不少學(xué)者報(bào)道,維生素K3對某些腫瘤細(xì)胞系的增殖具有抑制作用,能夠作用于細(xì)胞使其凋亡。近年來新發(fā)現(xiàn)的*個(gè)具有磷酸酶活性的抑癌基因PTEN基因,它不僅表現(xiàn)出抑癌基因的特性,而且還具有磷酸酶活性,能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和死亡,且在細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和粘連等方面有重要作用。林延峰[44]等在對膀胱癌組織切片進(jìn)行檢測后發(fā)現(xiàn),70例癌切片的PTEN表達(dá)陽性率是39%,與之相對應(yīng)的癌旁組織中,PTEN的陽性表達(dá)率為100%。張建華等[45]同樣也是用免疫組化的方法來檢測PTEN蛋白的表達(dá),結(jié)果顯示癌組織中的陽性率有53.2%,其良性病變中表達(dá)陽性率。諸多學(xué)者的研究都顯示了抑癌基因PTEN與膀胱癌的發(fā)生發(fā)展有著緊密,研究PTEN對于深入了解其作用機(jī)制和為基因診療奠定理論基礎(chǔ)。雖然膀胱癌的治療取得了一定進(jìn)展,但術(shù)后患者出現(xiàn)的高復(fù)發(fā)率成為膀胱癌臨床治療方面面臨的重大難題之一,因此探VitK3聯(lián)合吡柔比星增強(qiáng)其抑癌率以及探索PTEN基因的表達(dá)在吡柔比星及其聯(lián)合治療中產(chǎn)生的作用成為了如今研究的一個(gè)重要方面。目的:研究VitK3聯(lián)合吡柔比星對于上皮癌細(xì)胞BIU-87的影響,并分析與PTEN基因表達(dá)相關(guān)性,為臨床上膀胱聯(lián)合灌注及膀胱相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控提供了依據(jù)。方法:培養(yǎng)人膀胱癌細(xì)胞BIU-87;使用MTT(噻唑藍(lán))法分別篩選出吡柔比星和Vitamin K3作用于BIU-87細(xì)胞3天后的zui宜用藥濃度;設(shè)立空白對照組,吡柔比星作用組,Vitamin K3作用組、聯(lián)合用藥組,MTT法檢測各組細(xì)胞存活率;采用流式細(xì)胞儀觀察人膀胱癌BIU-87細(xì)胞培養(yǎng)株的凋亡情況,通過流式軟件分析細(xì)胞周期變化;通過Q-PCR實(shí)驗(yàn)分析各個(gè)實(shí)驗(yàn)組中人膀胱癌BIU-87細(xì)胞PTEN基因表達(dá);通過Western blot實(shí)驗(yàn)檢測各個(gè)實(shí)驗(yàn)組BIU-87細(xì)胞中PTEN蛋白的表達(dá);結(jié)果:吡柔比星藥物濃度在1mg/L到100mg/L濃度范圍中可以有效抑制BIU-87細(xì)胞的增殖(P<0.05);Vitamin K3藥物濃度在5 umol/L到20 umol/L的濃度范圍里可以有效抑制BIU-87細(xì)胞的增殖(P<0.05);Vitamin K3聯(lián)合吡柔比星用藥抑制對于BIU-87細(xì)胞的增殖效果更好(P<0.05);采用吡柔比星1mg/L濃度干預(yù)BIU-87細(xì)胞可以促進(jìn)其發(fā)生凋亡(P<0.05),使得其細(xì)胞周期阻滯于G2/M期(P<0.05),采用Vitamin K3 5 umol/L濃度干預(yù)BIU-87細(xì)胞可以促進(jìn)其發(fā)生凋亡(P<0.05),但其細(xì)胞周期與陰性對照組相比較無顯著差異(P>0.05),Vitamin K3聯(lián)合吡柔比星干預(yù)BIU-87細(xì)胞可以使其發(fā)生更多凋亡(P<0.05),使得BIU-87細(xì)胞周期阻滯于G2/M期(P<0.05);采用吡柔比星1mg/L濃度干預(yù)BIU-87細(xì)胞可以提高PTEN的m RNA和蛋白的表達(dá)水平(P<0.05),采用Vitamin K35 umol/L濃度干預(yù)BIU-87細(xì)胞可以提高PTEN的m RNA和蛋白的表達(dá)水平(P<0.05),Vitamin K3聯(lián)合吡柔比星干預(yù)BIU-87細(xì)胞可以更多提高PTEN的m RNA和蛋白的表達(dá)水平(P<0.05);結(jié)論:一定濃度的Vitamin K3聯(lián)合吡柔比星作用可以顯著抑制人膀胱癌細(xì)胞BIU-87的增殖,提高PTEN的表達(dá)水平,促使BIU-87細(xì)胞發(fā)生凋亡并將其細(xì)胞周期阻滯于G2/M期。 還原

關(guān)鍵詞：PTEN; 膀胱癌; VitK3; 吡柔比星;

導(dǎo)師：吳萬瑞; 李遠(yuǎn)偉;

分類號(hào)：R737.14