依據(jù) GB /T 22388-2008

1. 前處理

預(yù)處理：
液態(tài)奶：取原料乳5g，于50ml 離心管中，分別加入500ul，10ppm 的標(biāo)準(zhǔn)液（保證每kg 原料乳中各含1mg 標(biāo)樣）、15ml 0.1%三氯yi酸溶液和5ml 乙腈，渦旋1min， 超聲20min，4500r/min 離心15min。取出上清液，用0.1%三氯yi酸定容至25ml 容量瓶中。振蕩均勻，從中取5ml，再加入5ml 水作為上樣液。

奶粉：取奶粉5g，于50ml 離心管中，分別加入500ul，10ppm 的標(biāo)準(zhǔn)液（保證每kg 奶粉中各含1mg 標(biāo)樣），15ml 0.1%三氯yi酸溶液和5ml 乙腈，渦旋1min，超聲1h，放置冰箱中2h，4500r/min 離心15min。取出上清液，用0.1%三氯yi酸定容至25ml 容量瓶中。振蕩均勻，從中取5ml，再加入5ml 水作為上樣液。
Ps：由于奶粉不含水份，相對(duì)與液態(tài)奶，脂類(lèi)與其他添加成分可能更多，因此增加超聲時(shí)間及冷卻步驟，以保證蛋白沉降*。

凈化：
固相萃取小柱：
InertSep MPC 3ml/60mg 貨號(hào)5010-27121 或WondaSep MPC 3ml/60mg 貨號(hào)5010-MPC
活化：3ml 甲醇和5ml 水
上樣：前處理后，備用的上樣液
淋洗：3ml 水、3ml 甲醇
洗脫：6ml 5%氨水-甲醇
濃縮復(fù)溶：40 度氮?dú)獯蹈?，加?ml 3Mmol/L 醋酸銨溶液：乙腈=20：80 的流動(dòng)相，濾膜
過(guò)濾后，HPLC 分析。

2. 色譜分析

色譜柱：Inertsil HILIC 5um 4.6*250mm
流動(dòng)相：A—2 mmol/L 醋酸銨溶液 B—乙腈
梯度表如下：

表1 梯度表

流速：1.0ml/min 柱溫：40℃ 進(jìn)樣量：10ul 檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm
儀器：Shimadzu LC-20A

3.基質(zhì)加標(biāo)回收率結(jié)果

三次平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果（基質(zhì)加標(biāo)濃度均為1mg/kg）：
—液態(tài)奶

表2 液態(tài)奶加標(biāo)回收率

—奶粉

表2 液態(tài)奶加標(biāo)回收率

4. 結(jié)論

在此實(shí)驗(yàn)條件下，采用固相萃取小柱InertSep MPC 3ml/60mg或WondaSep MPC 3ml/60mg 分 析原料乳與奶粉中的三聚氰胺，回收率*要求。