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關鍵詞:免疫組化服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌免疫組化服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
免疫組化服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:
測序實驗流程:
免疫組織化學技術按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
一 免疫組化(LP 法)操作步驟
1. 切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復,可在此步后進行
⒉ 緩沖液洗 3min/2 次。
⒊ 為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
⒋ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒌ 滴加 Ultra V Block , 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
(注:孵育不要超過 10 分鐘,否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清,這一步可以省略。)
⒍ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者zui終決定)
⒏ 緩沖液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增強子),在室溫下孵育 20 分鐘。
10 .緩沖液洗 5min/2 次。
11 .滴加 HRP Polymer(酶標二抗) ,在室溫下孵育 30 分鐘。
(注:HRP Polymer 對光敏感,應避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。)
12 .緩沖液洗 5min/2 次。
13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen),混勻后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分鐘。(具體時間由染色深淺決定。)
14 .自來水充分沖洗,復染,脫水,透明,封片。
免疫組化SP法步驟:
1.烤片,68℃,20分鐘,
2. 常規(guī)二甲苯脫蠟,梯度酒精脫水;二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min
3.阻斷 滅活內源性過氧化物酶:3%H2O2 37℃孵育10min,PBS沖洗3X5min;
4. 抗原修復:置0.01M枸櫞酸緩沖液(PH 6.0)中用煮沸(95℃,15-20min),自然冷卻20min 以上,再用冷水沖洗缸子,加快冷卻至室溫,PBS沖洗3X5min。
5. 正常羊血清工作液封閉,37℃10 min,傾去勿洗.
6. 滴加一抗4℃ 冰箱孵育,PBS沖洗3X5min(用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照);
滴加生物素標記二抗, 37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
7. 滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液,37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
8. DAB/ H2O2反應染色,自來水充分沖洗后,
蘇木素復染,常規(guī)脫水,透明,干燥,封片。
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