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關(guān)鍵詞:免疫組化|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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免疫組化|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
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產(chǎn)品品牌:
測序?qū)嶒?yàn)流程:
免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
一 免疫組化(LP 法)操作步驟
1. 切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù),可在此步后進(jìn)行
⒉ 緩沖液洗 3min/2 次。
⒊ 為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
⒋ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒌ 滴加 Ultra V Block , 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
(注:孵育不要超過 10 分鐘,否則會(huì)導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清,這一步可以省略。)
⒍ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時(shí)。(具體孵育時(shí)間和溫度由試驗(yàn)者zui終決定)
⒏ 緩沖液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增強(qiáng)子),在室溫下孵育 20 分鐘。
10 .緩沖液洗 5min/2 次。
11 .滴加 HRP Polymer(酶標(biāo)二抗) ,在室溫下孵育 30 分鐘。
(注:HRP Polymer 對(duì)光敏感,應(yīng)避免不必要的光暴露并儲(chǔ)存在不透明的小瓶中。)
12 .緩沖液洗 5min/2 次。
13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen),混勻后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分鐘。(具體時(shí)間由染色深淺決定。)
14 .自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。
二.免疫組化操作步驟
⑴、石蠟切片脫蠟至水。
⑵、 3%H 2 O 2 室溫孵育 5-10 分鐘,以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。
⑶、蒸餾水沖洗, PBS 浸泡 5 分鐘 x2 (如需抗原修復(fù),可在此步后進(jìn)行)。
⑷、 5-10% 正常山羊血清(PBS 稀釋)封閉,室溫孵育 10 分鐘,傾去血清,勿洗。滴加 一抗 工作液, 37 ℃ 孵育 1-2 小時(shí)或 4 ℃ 。
⑸、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。
⑹、滴加適量 生物素標(biāo)記二抗 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。
⑺、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。
⑻、滴加適量的 辣根酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉卵白素 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。
⑼、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。
⑽、顯色劑顯色 3-15 分鐘(DAB 或 NBT/BCIP)
⑾、自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。
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