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        1. 上海拜力生物科技有限公司

          免疫組化|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

          時(shí)間:2015-9-1閱讀:45

          關(guān)鍵詞:免疫組化|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
          簡介:世界*品牌免疫組化|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
          免疫組化|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
          我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
          產(chǎn)品品牌:   
          測序?qū)嶒?yàn)流程:
          免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
          一 免疫組化(LP 法)操作步驟
          1. 切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù),可在此步后進(jìn)行
          ⒉ 緩沖液洗 3min/2 次。
          ⒊ 為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
          ⒋ 緩沖液洗 5min/2 次。
          ⒌ 滴加 Ultra V Block , 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
          (注:孵育不要超過 10 分鐘,否則會(huì)導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清,這一步可以省略。)
          ⒍ 緩沖液洗 5min/2 次。
          ⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時(shí)。(具體孵育時(shí)間和溫度由試驗(yàn)者zui終決定)
          ⒏ 緩沖液洗 5min/2 次。
          9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增強(qiáng)子),在室溫下孵育 20 分鐘。
          10 .緩沖液洗 5min/2 次。
          11 .滴加 HRP Polymer(酶標(biāo)二抗) ,在室溫下孵育 30 分鐘。
          (注:HRP Polymer 對(duì)光敏感,應(yīng)避免不必要的光暴露并儲(chǔ)存在不透明的小瓶中。)
          12 .緩沖液洗 5min/2 次。
          13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen),混勻后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分鐘。(具體時(shí)間由染色深淺決定。)
          14 .自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。
          二.免疫組化操作步驟
          ⑴、石蠟切片脫蠟至水。
          ⑵、 3%H 2 O 2 室溫孵育 5-10 分鐘,以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。
          ⑶、蒸餾水沖洗, PBS 浸泡 5 分鐘 x2 (如需抗原修復(fù),可在此步后進(jìn)行)。
          ⑷、 5-10% 正常山羊血清(PBS 稀釋)封閉,室溫孵育 10 分鐘,傾去血清,勿洗。滴加 一抗 工作液, 37 ℃ 孵育 1-2 小時(shí)或 4 ℃ 。
          ⑸、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。
          ⑹、滴加適量 生物素標(biāo)記二抗 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。
          ⑺、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。
          ⑻、滴加適量的 辣根酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉卵白素 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。
          ⑼、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。
          ⑽、顯色劑顯色 3-15 分鐘(DAB 或 NBT/BCIP)
          ⑾、自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。

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